小睑裂综合症相关基因SOX14在4株宫颈癌细胞系中的表达研究

发布时间：2017-12-24 01:30

本文关键词：小睑裂综合症相关基因SOX14在4株宫颈癌细胞系中的表达研究　出处：《潍坊医学院》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景:小睑裂综合征(BPES)是一种常染色体显性遗传病,其病变基因定位于人3号染色体长臂端23位点,典型的BPES包括上睑下垂、睑裂狭小和倒向型内眦赘皮等特征。正常成年人在水平方向上的睑裂长度应该是25至30毫米,而小睑裂综合征患者常为20至22毫米。上睑下垂是由于上睑提肌腱膜发育异常导致上睑提肌功能缺陷引起的。小睑裂综合征患者还常表现出其他眼外特征,除了不育之外,最常见的是小头畸形和肢体畸形。基因检测发现,几乎所有伴有小头畸形和肢体畸形的小睑裂综合征患者都有3号染色体的中间缺失,缺失部分包括3q23。SOX14基因定位在人类染色体3q23位点上,编码一个在脊椎动物中高度保守的转录抑制因子。近年来国外许多学者在小睑裂综合征患者中发现了这个基因变异,也印证了它与该疾病患者肢体畸形、小头畸形等表现有关。本课题主要研究小睑裂综合症相关基因SOX14在几株宫颈癌细胞系中的表达情况。目的:考虑到SOX14主要在胚胎期表达,本课题通过RT-PCR,荧光定量PCR和免疫印迹技术检测小睑裂综合症相关基因SOX14在几株宫颈癌细胞系中的表达情况。以讨论小睑裂综合症相关基因SOX14,作为宫颈癌标记分子的潜在可能性。材料与方法:通过Trizol法分别提取293T,Hela,HT-3,Caski,Si Ha的总RNA并用甲醛琼脂糖变性凝胶电泳鉴定提取的总RNA质量。之后,用fermentas逆转录试剂盒提供的oligo(d T)18作为引物,逆转录总RNA中的全部m RNA,得到c DNA。以c DNA为模板,用设计好的SOX14引物,做普通PCR,检测各个细胞株中是否存在SOX14基因表达,并通过凝胶电泳鉴定结果。在用荧光定量PCR检测SOX14在m RNA水平上各个细胞株中的表达差异,做扩增曲线和溶解曲线鉴定扩增质量。并以293T细胞为参照,计算其他4株宫颈癌细胞系中SOX14在m RNA水平的相对表达量。最后,通过免疫印迹法,证实SOX14在蛋白水平是否存在表达及相对表达差异。结果:甲醛琼脂糖变性凝胶电泳结果显示,提纯的细胞总RNA质量较好,可以继续进行下一步的逆转录实验。逆转录PCR凝胶电泳结果显示,在几株细胞系中都检测到了SOX14基因的m RNA,说明SOX14基因在m RNA水平存在表达。以293T细胞系为参照的荧光定量PCR结果显示,SOX14在m RNA水平的表达量远低于作为内参的beta-actin基因。在本研究采用的宫颈癌细胞系中,Si Ha细胞系SOX14基因的m RNA表达量最大,Hela细胞系和HT-3细胞系的SOX14基因的m RNA表达量次于Si Ha细胞系。Caski细胞系的SOX14基因表达量最少。免疫印迹结果显示,SOX14蛋白在5种细胞株中都有表达。SOX14的蛋白表达量远低于beta-actin蛋白,这点与荧光定量PCR的结果一致。在几株细胞系中,Caski的Sox14蛋白表达量最低,在免疫印迹中的条带有些模糊。结论:本研究证实了SOX14在所选取的几株宫颈癌细胞中都存在表达。意外的是,我们也在293T细胞中发现了SOX14的表达。我们便以293T细胞为参照,探讨了SOX14在各个宫颈癌细胞中的相对表达量。荧光定量PCR的结果显示Si Ha细胞的SOX14基因表达量最大,而Caski细胞的SOX14基因表达量最小,而免疫印迹的结果则显示了Hela,Si Ha,HT-3细胞在蛋白表达层面无差异,Caski细胞的SOX14基因表达量最小。考虑到SOX14基因只在正常组织的胚胎期表达,本研究的结果初步暗示了SOX14基因,作为小睑裂综合症的相关基因,成为宫颈癌标志基因的潜在可能性。
【学位授予单位】：潍坊医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R777.1

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