黄体酮对大鼠视神经损伤修复的影响

发布时间：2018-03-23 10:49

  本文选题：视神经　切入点：视网膜　出处：《河北医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的：视神经损伤是眼科临床常见的眼外伤，严重者常导致视力永久性的丧失，是重要的致盲性眼病之一。目前临床上治疗本病主要以药物主，但治疗效果不明显，且副作用较多，因此寻找一种有效的治疗药物备受眼科学者的关注。近年来国内外学者在脑损伤的研究中发现黄体酮替代治疗可延缓神经细胞的凋亡，减轻水肿，促进神经髓鞘的合成，对神经系统的损伤和退行性疾病的治疗有重要意义。黄体酮作为一种能在神经系统合成的神经活性甾体，其对神经系统的保护作用，越来越受到临床的关注。但有关黄体酮针对视神经损伤修复方面的报道很少见。因此本实验通过建立大鼠视神经损伤模型，给予黄体酮治疗，观察视网膜神经节细胞的病理形态，并应用免疫组化方法及计算机图像分析技术对胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor-1, IGF-1）及水通道蛋白-4（Aquaporin-4,AQP4）的表达进行半定量测定，探讨黄体酮对视网膜神经节细胞的保护机制，为视神经损伤的治疗提供实验依据。 方法：清洁级健康雄性SD大鼠50只，体重为200g±20g，眼部检查无眼疾。随机分为3组：正常组10只（20眼）用于正常对照（不予处理）；对照组20只（右眼制备成视神经不完全损伤模型，即沿大鼠颞侧眼球暴露视神经，在球后2mm处用78g反向镊夹持视神经20s，1小时后开始给予8mg/kg蒸馏水腹腔注射，每日一次，至实验结束）；治疗组20只（右眼制备成视神经不完全损伤模型，即沿大鼠颞侧眼球暴露视神经，在球后2mm处用78g反向镊夹持视神经20s，1小时后开始给予8mg/kg黄体酮注射液腹腔注射，每日一次，至实验结束）。按伤后1天、3天、7天、14天、28天分五个时间点，各时间点每组分别取4只眼的视网膜，用与HE染色观察视网膜的形态学变化和应用免疫组织化学法半定量检测IGF-1及AQP4的平均光密度值。实验数据用均数±标准差表示，结果采用方差分析和两样本t检验，SPSS13.0软件包进行统计学分析。 结果： 1HE染色结果 1.1正常组视网膜的内界膜完整、平滑，视网膜神经节细胞呈卵圆形，细胞大小一致，核清晰，轮廓规则，细胞边界清楚，内、外丛状层的厚度及染色均匀。 1.2对照组损伤后1天，视网膜水肿，神经节细胞层及内、外核层的细胞排列稍紊乱，细胞间隙增大。损伤后3天，视网膜的水肿加重，神经节细胞数目变少，，多数可见空泡样改变，胞核呈固缩状态，染色质染色不均，内、外核层细胞排列得疏松、紊乱。损伤后7天视网膜的水肿有减轻，大部分神经节细胞可见空泡样改变，细胞数目明显变少，内、外核层的细胞紊乱程度加重。损伤后14天视网膜的水肿略减轻，细胞形态和数目于7天组相近，未见进一步大量减少。 1.3治疗组损伤后1天，视网膜略见水肿，节细胞层未见显著变化，内、外核层的细胞排列呈轻微紊乱，内核层细胞间隙稍变大。损伤后3天，视网膜有水肿，少数节细胞可见空泡样改变，内、外核层的细胞较对照组整齐、紧密。损伤后7天，和对照组相比，视网膜水肿显著减轻，多数细胞较整齐排列。损伤后14天，视网膜水肿减轻，视网膜厚度与正常组接近。各时间点节细胞形态、数目的变化及视网膜的水肿程度较对照组均显著减弱。 2免疫组化结果 2.1视网膜组织中IGF-1的表达在正常视网膜组织中IGF-1呈弱阳性表达，平均光密度值为0.0716±0.0035，各时间点无变化。对照组在损伤后的1天、3天、7天时IGF-1的表达分别为0.0921±0.0010、0.1303±0.0044、0.1502±0.0054，均较正常组升高，具有统计学意义（p0.05），7天后表达下降，14天时接近于正常组，平均光密度值为0.0750±0.0025，无统计学意义（p0.05）。治疗组与对照组相比，在损伤后各时间点IGF-1的阳性表达均明显增强，平均光密度值分别为0.1181±0.0066、0.1999±0.0064、0.2855±0.0074、0.1809±0.0075、0.1041±0.0027，有统计学意义(p0.05)。 2.2视网膜组织中AQP4的表达在正常视网膜组织中AQP4呈弱阳性表达，平均光密度值为0.0782±0.0011，各时间点无变化。对照组AQP4在损伤后1天表达开始升高，3天时表达最高，7天开始下降，14天仍高于正常组，平均光密度值分别为0.1946±0.0095、0.4324±0.0078、0.3812±0.0042、0.2066±0.0089，28天时接近于正常组，除28天较正常组无统计学意（p0.05），其余各时间点较正常组具有统计学意义(p0.05)。治疗组与对照组相比，在实验的1天、3天、7天、14天AQP4的阳性表达均明显降低，平均光密度值分别为0.1199±0.0044、0.3205±0.0058、0.2306±0.0145、0.1341±0.0025，高于正常组，具有统计学意义(p 0.05)，28天时差异无统计学意（p0.05）。 结论： 1正常视网膜组织中AQP4呈弱阳性表达，大鼠视神经不完全损伤后视网膜组织中AQP4表达增强，AQP4参与了视神经损伤的过程。 2正常视网膜组织中IGF-1呈弱阳性表达，大鼠视神经不完全损伤后早期视网膜组织中IGF-1表达增强，IGF-1参与了视神经损伤的过程。 3应用黄体酮治疗能够降低大鼠视神经不完全损伤后视网膜组织中AQP4的表达。 4应用黄体酮治疗能够持续升高大鼠视神经不完全损伤后视网膜组织中IGF-1的表达。 5黄体酮对视网膜细胞再生修复有一定的促进作用。
[Abstract]:Objective: optic nerve injury is a common clinical ocular trauma, which often leads to permanent loss of visual acuity, is one of the important cause of blindness. At present the clinical treatment of the disease mainly on drugs, but the treatment effect is not obvious, and more side effects, so to find an effective drug treatment by ophthalmologists attention. In recent years the domestic and foreign scholars in the study of brain injury was found in apoptosis, progesterone replacement therapy can delay the nerve cell edema, promote the synthesis of myelin, have important significance for treatment of damage and degenerative disease of the nervous system. Progesterone is a steroid synthesis in neural activity of the nervous system. The protective effect on the nervous system, more and more clinical attention. The effects of progesterone on optic nerve injury repair reports are rare. Therefore this experiment through the establishment of rat optic nerve The injury model, given progesterone, observe the pathological retinal ganglion cells, and immunohistochemistry method and image analysis technology of insulin-like growth factor -1 (Insulin-like growth factor-1, IGF-1) and aquaporin -4 (Aquaporin-4, AQP4) by semi quantitative expression, the mechanism of the protective effect of progesterone on retinal ganglion cells and provide experimental basis for the treatment of optic nerve injury.
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本文编号：1653136