高迁移率家族蛋白1在小鼠过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎中的表达及其意义

发布时间：2018-03-23 18:38

  本文选题：过敏性鼻炎　切入点：急性细菌性鼻窦炎　出处：《华中科技大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分高迁移率家族蛋白1在过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎小鼠鼻黏膜中的表达及变化情况目的：分别建立过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎小鼠模型。研究高迁移率家族蛋白1分别在过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎中的变化情况,探究其在上呼吸道急性炎症中的意义；研究炎症小体分别在急性细菌性鼻窦炎及过敏性鼻炎中的变化情况,探究其参与HMGB1释放的可能性方法：选取SPF级BALB/c小鼠,于实验第1、8、15日腹腔注射200μl含有40μg卵清蛋白(OVA)及2mg氢氧化铝的PBS,于实验第22日开始连续以浓度为250gg/10μl的OVA溶液对双侧鼻腔激发7日以建立急性过敏性鼻炎小鼠模型,末次OVA激发后计数10分钟内小鼠挠鼻及喷嚏次数,24小时后处死并收集标本；选取SPF级C57BL/6,以20μl浓度为1mg/ml的脂多糖溶液双侧鼻腔滴加1次以建立急性细菌性鼻窦炎小鼠模型,分别于首次滴加脂多糖后的第4日处死小鼠,收集标本进行后续研究。处死小鼠后于解剖显微镜下收集小鼠鼻腔黏膜,通过western-blot分别检测Nlrp3、AIM2、 Asc、caspase-1及HMGB1的表达变化,剩余小鼠经灌注后行鼻腔灌洗,固定后脱钙并脱水包埋用于后续形态学及免疫组化研究。结果：1.过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜内可见大量嗜酸性粒细胞浸润,血清中IgE含量较对照组明显上升,过敏性鼻炎小鼠模型建立成功；2脂多糖滴加4日后可见小鼠窦腔内大量中性粒细胞渗出,急性细菌性鼻窦炎建立成功;3.急性细菌性鼻窦炎小鼠鼻腔黏膜增厚伴有中性粒细胞浸润。3.急性细菌性鼻窦炎小鼠鼻黏膜中Nlrp3、Asc、caspase-1p20等Nlrp3炎症小体组分表达增高,HMGB1表达增高且出现胞浆转位。4.过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜中AIM2、Asc、caspase-1 p20等AIM2炎症小体组分表达增高,而Nlrp3表达下降,TUNEL显示TUNEL阳性细胞数较正常组明显增多,同时未观察到caspase-3及PARP-1的剪切,提示细胞炎性死亡的发生。结论：AR及ABRS小鼠鼻黏膜中存在HMGB1表达升高及释放,AIM2炎症小体和Nlrp3炎症小体分别在AR和ABRS小鼠鼻黏膜中激活,可能参与了HMGB1的释放。第二部分丙酮酸乙酯通过抑制高迁移率家族蛋白1减轻小鼠过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎目的：分别建立过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎小鼠模型,并利用丙酮酸乙酯进行干预,观察疾病模型中丙酮酸乙酯的作用,同时对其通过HMGB1发挥作用的机制进行初步探讨。方法：同第一部分分别建立过敏性鼻炎及急性细菌性鼻窦炎小鼠模型,在给予OVA刺激前30分钟以各浓度(50mg/kg、100mg/kg)丙酮酸乙酯对AR小鼠进行腹腔注射,后进行OVA激发持续至模型建立结束。急性细菌性鼻窦炎组小鼠于滴加LPS前30分钟予以50mg/kg丙酮酸乙酯腹腔注射,后滴加LPS。小鼠于滴加LPS后4日处死,收集标本并通过HE染色比较各组间中性粒细胞浸润情况,western-blot及免疫组化观察HMGB1胞浆转位及表达情况,同时TLR-4及NF-κB的表达情况也一并检测。过敏性鼻炎小鼠组于末次激发后计数小鼠挠鼻及喷嚏次数,次日处死小鼠,收集标本。处死小鼠后于解剖显微镜下收集小鼠鼻腔黏膜,通过western-blot及免疫组化检测HMGB1的表达变化,剩余小鼠经灌注后行鼻腔灌洗,鼻腔灌洗液用于检测各组IL-4、IL-13变化情况,血清用于检测OVA相关IgE、Ig2a及IgG1的变化情况。结果：1.OVA诱导过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜内可见大量嗜酸性粒细胞浸润,丙酮酸乙酯处理显著降低嗜酸性粒细胞浸润程度,且减轻效果呈剂量依赖性。丙酮酸乙酯显著抑制过敏性鼻炎小鼠鼻黏膜内HMGB1的表达以及胞浆转位,并减轻过敏性鼻炎小鼠挠鼻及喷嚏等过敏性鼻炎症状(p0.05)。丙酮酸乙酯显著降低过敏性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-13的含量。丙酮酸乙酯对血清中OVA相关IgE、Ig2a及IgG并无显著作用。2.脂多糖诱导急性鼻窦炎小鼠鼻窦腔内可见大量中性粒细胞渗出,50mg/kg丙酮酸乙酯组小鼠窦腔内中性粒细胞渗出较实验组少,对照组窦腔内未见炎性细胞渗出。免疫组化结果示急性细菌性鼻窦炎小鼠鼻黏膜中TLR-4、NF-κB及HMGB1表达较对照组显著增高,丙酮酸乙酯组较实验组TLR-4、NF-κB及HMGB1表达降低。结论：丙酮酸乙酯可有效减轻AR及ABRS,这部分作用可能是通过减少HMGB1表达及释放来实现的
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本文编号：1654691