生存素基因沉默调控喉鳞癌细胞辐射敏感性研究

发布时间：2018-04-02 11:36

  本文选题：喉鳞状细胞癌　切入点：生存素基因　出处：《武汉大学》2015年博士论文

【摘要】：背景：喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma, LSCC),占所有癌症的1.5%以及喉癌的绝大部分(约96%),是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,近年来,喉鳞状细胞癌的发病率正在逐渐增加。放疗在喉癌的治疗中起着重要作用,特别是对早期阶段,这被认为是有效的治疗方式。早期的喉癌患者通常能够通过手术或放疗治愈,但是,进展期不能手术的晚期喉癌病人与预后不良有关。此外,尽管包括手术治疗、放疗和化疗在内的诊断和治疗策略有所进展,但是在过去三十年里,喉鳞状细胞癌的临床治疗结果尚未明显改善,这很大程度与肿瘤的复发、转移以及抗放化疗敏感性有关。生存素(Survivin)基因位于人类染色体17q25,由单一基因编码(距离端粒的位置约为3%),是凋亡抑制蛋白(IAP)家族中最小的成员,相对分子质量为16.5 kDo Survivin抑制线粒体凋亡途径的功能是通过其单一的重复(BIR)域完成的。但是由于Survivin在细胞周期中的G2/M期表达,支持细胞的快速分裂,许多学者认为,Survivin基因的主要功能在于控制细胞分裂,而不是抑制细胞凋亡。此外,除了睾丸,胸腺和胎盘外,Survivin通常在大多数正常成人组织表达水平极低。但在胎儿发育过程中,以及包括喉癌在内的多数肿瘤中,生存素广泛表达。近年来的研究发现,Survivin与肿瘤细胞的凋亡密切相关,但是,Survivin在喉鳞状细胞癌的放疗治疗中的相关作用未见报道,通过研究Survivin在喉鳞状细胞中的作用机制,可以为临床研究打下坚实的基础。实验目的：本实验旨在探讨沉默Survivin基因和辐射处理联合使用对喉鳞状细胞癌细胞系的增殖和凋亡的影响,以挖掘Survivin在喉鳞状细胞癌发生发展中可能扮演的角色,为喉鳞状细胞癌的治疗、防治提供新的策略。实验方法：本研究首先将沉默基因所用的shRNA序列插入到含GFP的质粒载体pGCsi-H1中,构建pGCsi-H1-shRNA和pGCsi-Hl-control(对照)两种质粒载体。然后采用MTS细胞增殖检测法分析辐射剂量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)条件下处理Hep-2细胞后细胞的增殖情况以及沉默Survivin基因后,辐射剂量(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)条件下处理Hep-2细胞24h、48h、72h后细胞辐射敏感性的改变以及细胞增殖的情况；接着,采用流式细胞技术检测沉默Survivin基因后,8Gy辐射剂量条件下处理Hep-2细胞24h后细胞周期分布以及细胞凋亡的变化情况；最后检测8Gy辐射剂量条件下沉默Survivin基因的荷瘤小鼠的肿瘤生长。比较试验各组肿瘤体积的大小。实验结果：本研究结果显示,Westemblot和qRT-PCR法检测发现Survivin-shRNA转染后能明显减少人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞中survivin基因mRNA和蛋白的表达水平(P0.01); MTS细胞增殖实验检测发现辐射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)条件下处理Hep-2细胞对细胞生长有抗增殖作用,并且呈现时间-剂量依赖性；沉默Survivin基因后,辐射(2Gy、4Gy、8Gy、12Gy)处理Hep-2细胞24h、48h、72h后,沉默Survivin基因组相对于对照组喉鳞状细胞癌的细胞生存率明显降低(P0.05)；流式细胞技术分析发现辐射(8Gy)处理Hep-2细胞24h后,Survivin基因沉默组抑制了辐射诱导的G2期细胞阻滞(P0.01),增加了G1期细胞比例(P0.05)。辐射和Survivin基因沉默均诱导了细胞凋亡,但Survivin基因沉默与辐射协同会诱导更大程度的凋亡(P0.01)。裸鼠成瘤实验发现辐射(8Gy)处理荷瘤小鼠(Hep-2细胞移植瘤)24h后,沉默Survivin基因小鼠组的肿瘤生长程度较空白组明显受到抑制(P0.01)。实验结论：1)辐射处理对喉鳞状细胞癌的细胞生长有抗增殖作用,并且呈现时间-剂量依赖性；2)沉默Survivin基因具有提高喉鳞状细胞癌细胞辐射敏感性的作用,辐射处理条件下,沉默Survivin基因组相对于对照组喉鳞状细胞癌的细胞生存率明显降低；3)Survivin基因沉默组抑制了辐射诱导的G2期细胞阻滞(P0.01),增加了G1期细胞比例(P0.05)。辐射和Survivin基因沉默均诱导了细胞凋亡,但Survivin基因沉默与辐射协同诱导更大程度的凋亡(P0.01)。4)辐射处理条件下,沉默Survivin基因荷瘤小鼠组的肿瘤生长程度较对照组明显受到抑制。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.65

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 黄新生,周娴,王建中;喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体表达的临床意义[J];上海医学;2003年07期

2 张灵敏;田秀芬;;葡萄糖调节蛋白78在人喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2013年15期

3 ;喉鳞状细胞癌中蛋白质酪氨酸激酶的活性[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;1994年01期

4 金德均,王超,李晓丹;Epstein-Barr病毒与喉鳞状细胞癌发生的相关性研究[J];中华耳鼻咽喉科杂志;2001年03期

5 王斌全,陈彦球,温树信,夏立军,王建明,皇甫辉,龚佳蕾,何显峰;复发喉鳞状细胞癌相关基因表达谱研究[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2003年06期

6 黄志纯,邓红,张凤兵,蒋静娟,刘东风;转化生长因子β_1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2003年09期

7 刘巍巍,曾宗渊,吴秋良,候景辉,陈义勇;免疫组化检测明胶酶在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J];中国肿瘤临床;2004年02期

8 杨春平,罗英;喉鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子和碱性成纤维生长因子及微血管密度的检测及临床意义[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2005年07期

9 马俭,乔宗海,吴四海;细胞外基质金属蛋白酶诱导因子在喉鳞状细胞癌组织中的表达[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2005年12期

10 叶红飞,王立军,赵洪泊,白文忠,王向东;喉鳞状细胞癌中表皮生长因子受体基因过表达的研究[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2005年19期

相关会议论文 前10条

1 倪鑫;高晗;韩德民;黄志刚;房居高;陈晓红;陈学军;;微卫星不稳定在喉鳞状细胞癌中的意义[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议论文集[C];2006年

2 王冰;姬长友;关力谦;;血浆肝细胞生长因子在喉鳞状细胞癌中的意义[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

3 任晓勇;李文妍;许珉;汪立;王建刚;;人β-防御素2在喉鳞状细胞癌组织中表达的初步研究[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

4 许珉;李文妍;任晓勇;汪立;王建刚;;手术治疗喉鳞状细胞癌的预后分析[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编（下）[C];2007年

5 崔春莲;;延边地区女性喉鳞状细胞癌发病趋势的分析[A];吉林省医学会第九次耳鼻咽喉—头颈外科学术会议论文汇编[C];2011年

6 章如新;刘国均;余少卿;温武;;喉鳞状细胞癌基因表达谱的研究[A];全国中西医结合耳鼻咽喉科学术会论文汇编[C];2004年

7 徐洁洁;;内皮细胞特异性分子1在喉鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义[A];华东六省一市耳鼻咽喉-头颈外科学术会议暨2008年浙江省耳鼻咽喉-头颈外科学术年会论文汇编[C];2008年

8 Xiaolin Cao;Yaoshu Teng;Yong Li;Qiaoyun Li;;喉鳞状细胞癌伴原发性恶性纤维组织细胞瘤:1例报道(英文)[A];2012年浙江省耳鼻咽喉科学学术年会论文集[C];2012年

9 龚洪立;石毅;周梁;陶磊;吉建;陈惠雯;;幽门螺杆菌感染和喉鳞状细胞癌的相关性研究[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年

10 石毅;龚洪立;陶磊;曹文俊;周梁;;幽门螺杆菌感染和喉鳞状细胞癌的相关性研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

相关博士学位论文 前10条

1 高潮兵;ARTEMIN在喉鳞状细胞癌进展中的作用及其分子机制[D];安徽医科大学;2014年

2 胡江;生存素基因沉默调控喉鳞癌细胞辐射敏感性研究[D];武汉大学;2015年

3 李正江;喉鳞状细胞癌综合治疗的临床和实验研究[D];中国协和医科大学;2000年

4 贺光;喉鳞状细胞癌新的相关基因的研究[D];中国医科大学;2002年

5 李琳;炎性微环境对喉鳞状细胞癌促癌作用的研究[D];吉林大学;2008年

6 吴平安;反义整合素连接激酶寡核苷酸对上皮—间充质转型的调控及抑制喉癌转移的研究[D];中南大学;2010年

7 姚鸿超;肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导喉鳞状细胞癌凋亡的实验研究[D];中国医科大学;2007年

8 古庆家;喉鳞状细胞癌患者组织及血液中线粒体DNA突变的研究[D];四川大学;2005年

9 崔香艳;粉防己碱对喉鳞状细胞癌抑癌基因Brg1表达的影响及相关机制的研究[D];吉林大学;2010年

10 张军辉;OCT-4在喉鳞状细胞癌中的表达及意义[D];郑州大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 詹国文;微小RNA-34a在喉鳞状细胞癌的功能研究及临床意义[D];宁波大学;2012年

2 姜润学;BTG1在喉鳞状细胞癌中发生的作用及分子机制研究[D];河北联合大学;2014年

3 徐玉茹;MAGE-A9和MAGE-A11在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义[D];河北医科大学;2015年

4 刘晓晓;PKM2和HIF-1α在喉鳞状细胞癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2015年

5 潘虹;喉鳞状细胞癌患者UGT1A1基因多态性的分析[D];山西医科大学;2015年

6 黄礼献;组蛋白乙酰化酶6（HDAC6）在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义[D];蚌埠医学院;2015年

7 刘亚超;葡萄糖调节蛋白78和钙网蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及相关性研究[D];河北医科大学;2015年

8 徐莲;CD47在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义和对喉癌细胞生物学行为的影响[D];南昌大学医学院;2015年

9 常凯;CLDN4在喉鳞状细胞癌中表达的研究[D];吉林大学;2016年

10 李琳;金属硫蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[D];吉林大学;2005年

，

本文编号：1700252