外源表达人激活要素受体ⅡA对人晶状体上皮细胞增殖的影响

发布时间：2018-04-28 19:49

  本文选题：激活素受体ⅡA + 人晶状体上皮细胞　； 参考：《吉林大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的: 探讨外源表达激活素受体ⅡA（Activin Receptor ⅡA,ActRⅡA）对人晶状体上皮细胞(Human Lens Epithelial Cell, HLEC)增殖的影响。 方法: (1)将ActRⅡA质粒酶切鉴定后连接到真核表达载体PC-DNA3.0上，共表达一段融合蛋白c-myc，构建重组质粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA；LDMEM培养基培养HLECs，以脂质体介导将重组质粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA和空载体质粒PC-DNA3.0分别转入该细胞，转染48h后，采用浓度为800ug/ml的G418进行筛选，建立稳定表达ActRⅡA的实验组和对照组细胞系；采用免疫印迹方法检测目的蛋白ActR ⅡA在HLECs的表达情况； (2)采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium，，MTT)方法分别检测实验组和对照组HLEC的增殖情况，分别在培养24h，48h，72h…10d后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配）20μl，37℃，5%CO2孵育4h后，用酶标仪在570nm波长处检测吸光度OD。 结果: 通过免疫印迹法检测到实验组较对照组ActRⅡA表达明显增多，通过MTT法检测HLEC增殖发现，实验组与对照组比较，两组差异显著性明显（P＜0.01），实验组细胞增殖受到明显的抑制，并随时间延长抑制作用逐渐增加。 结论: 外源基因ActRⅡA成功转染HLEC，构建了稳定表达ActRⅡA的HLEC细胞系；外源转入的激活素受体ⅡA（ActRⅡA）在HLECs内有较高表达；外源表达ActRⅡA对HLEC增殖有抑制作用，且随时间延长抑制逐渐明显，从而为基因治疗后发性白内障奠定了一定的理论基础。
[Abstract]:Objective: To investigate the effect of exogenous expression of activin receptor 鈪

本文编号：1816625