NgR介导的氧化应激在葡萄糖诱导视网膜神经节细胞凋亡中的作用
本文选题:视网膜神经节细胞 + NgR ; 参考:《锦州医科大学》2017年硕士论文
【摘要】:目的观察Ng R在葡萄糖诱导视网膜神经节细胞(Retinal ganglion cells,RGC)凋亡中氧化应激及线粒体途径的变化,并进一步探讨Ng R在葡萄糖诱导RGC凋亡中的作用机制。方法RGC-5细胞株分3组培养:对照组(DMEM高糖培养基+10%胎牛血清),高糖组(DMEM高糖培养基+10%胎牛血清+30mmol/L葡萄糖)、NEP1-40组(DMEM高糖培养基+10%胎牛血清+30mmol/L葡萄糖+1μmol/L NEP1-40)。各组RGC-5细胞株培养3d后检测各指标:显微镜观察RGC-5细胞生长状态,cell counting KIT-8法检测RGC-5细胞活力,流式细胞仪检测RGC-5细胞凋亡率,JC-1法检测RGC-5细胞线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,?Ψm),DCF荧光探针检测RGC-5细胞内ROS含量,TBA法检测RGC-5细胞内MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测RGC-5细胞内SOD活力,Western-blot检测RGC-5细胞Bcl-2、Bax蛋白,线粒体Cyt C(Mitochondrial cytochrome C,mito-Cyt C)及胞浆Cyt C(Cytoplasm cytochrome C,cyt-Cyt C)蛋白的表达。结果与对照组对比,添加葡萄糖预处理后,(1)高糖组RGC-5细胞生长缓慢、状态较差,且活力下降、凋亡率显著增加;(2)RGC-5细胞氧化应激相关指标ROS及MDA含量均升高,SOD活力下降;(3)RGC-5细胞?Ψm下降,抗凋亡Bcl-2蛋白表达降低而促凋亡Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax蛋白比值降低,mito-Cyt C表达降低而cyt-Cyt C表达增加,差异均有统计学意义(P0.05)。与高糖组相比,NEP1-40组抑制Ng R表达后,(1)RGC-5细胞状态改善,细胞活力提高,凋亡率降低;(2)RGC-5细胞氧化应激相关指标ROS及MDA含量均降低,SOD活力提高;(3)RGC-5细胞?Ψm上升,Bcl-2/Bax升高,mito-Cyt C表达增加而cyt-Cyt C表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论高糖状态能通过Ng R介导氧化应激反应诱导RGC凋亡,其机制可能与激活线粒体凋亡途径有关。
[Abstract]:Objective To observe the changes of oxidative stress and mitochondrial pathway of Ng R in the apoptosis of retinal ganglion cells ( RGC ) induced by glucose . Methods RGC - 5 cells were cultured in three groups : control group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum ) , high - sugar group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum + 30 mmol / L glucose ) , NEP1 - 40 group ( DMEM high - sugar medium + 10 % fetal bovine serum + 30 mmol / L glucose + 1 渭mol / L NEP1 - 40 ) . RGC - 5 cell viability was observed by microscope . RGC - 5 cell viability was detected by cell counting KIT - 8 . The apoptosis rate of RGC - 5 cells was detected by flow cytometry and JC - 1 method was used to detect the mitochondrial membrane potential of RGC - 5 cells . Results Compared with control group , the content of MDA in RGC - 5 cells was decreased , and the expression of Bcl - 2 , Bax protein , mitochondrial Cyt C ( mito - Cyt C ) and Cyt C ( cyt - Cyt C ) protein in RGC - 5 cells were decreased .
【学位授予单位】:锦州医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R587.2;R774.1
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,本文编号:1819449
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