IL-33在β-淀粉样蛋白刺激视网膜色素上皮细胞中的表达及作用机制研究

发布时间：2018-05-08 19:15

  本文选题：IL-33 + 视网膜色素上皮细胞　； 参考：《中国人民解放军军医进修学院》2012年博士论文

【摘要】：目的： 1.本课题以IL-33作为主要研究对象，研究其在β-淀粉样蛋白（Aβ）刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性。 2.初步探明IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制。 方法： 1. IL-33在β-淀粉样蛋白刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性研究 采用MTT法检测不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞后不同时间点的细胞存活率，观察其对视网膜色素上皮细胞损伤的影响。提取不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞24h后细胞RNA，采用定量PCR检测IL-33mRNA水平；收集细胞培养上清，ELISA检测IL-33蛋白表达；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信号通路抑制剂后，采用定量PCR及ELISA检测0.3μMAβ1-40刺激D407细胞24h后IL-33mRNA及蛋白水平表达，鉴定β-淀粉样蛋白刺激视网膜色素上皮细胞后调控产生IL-33的信号通路。 2. IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制研究 采用定量PCR检测不同浓度的IL-33刺激D407细胞16h后其受体ST2LmRNA表达情况，流式细胞术检测100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后细胞表面受体ST2L表达；不同浓度的IL-33刺激D407细胞16h后，收集细胞及培养上清，定量PCR和ELISA检测炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA和蛋白表达，探讨IL-33因子对D407细胞的作用机制；加入NF-κB，ERK1/2，JNK，p38MAPK信号通路抑制剂后，采用定量PCR及ELISA检测100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后上述炎症因子的表达，鉴定调控产生炎症因子的信号通路。 结果： 1. IL-33在β-淀粉样蛋白刺激人视网膜色素上皮细胞中的表达特性研究 1.10.3μM Aβ1-40刺激组较正常组细胞形态变圆，胞体肿胀，细胞排列数量减少，细胞间间隙增加，且随Aβ1-40刺激浓度增加变化明显，而小于0.3μM Aβ1-40刺激组细胞形态无明显变化。MTT检测结果表明：随着Aβ1-40刺激浓度的增加，细胞存活率逐渐下降，除了0.001μMAβ1-40刺激组外，其余各刺激组与正常对照组相比细胞存活率均显著降低(P 0.05)。随着0.3μM和1μM Aβ1-40刺激D407细胞时间的延长，细胞存活率也逐渐下降，且与对照组相比均有显著性差异(P 0.05)。 1.2不同浓度Aβ1-40刺激D407细胞后，IL-33mRNA及蛋白表达水平均增加，且在0.3μM刺激浓度时表达显著增加(P 0.05)。结果提示：Aβ1-40刺激D407细胞后能够引起IL-33表达上调。 1.3加入ERK1/2和p38MAPK信号通路抑制剂，0.3μM Aβ1-40刺激D407细胞24h后，IL-33mRNA表达水平显著降低(P 0.05)，但只有加入ERK1/2信号通路抑制剂后，细胞培养上清IL-33蛋白水平才有明显下降(P 0.05)。结果提示：Aβ1-40刺激D407细胞后，IL-33的产生主要是通过ERK1/2信号通路调控，而p38MAPK信号通路仅参与了IL-33转录水平的调控。 2. IL-33在人视网膜色素上皮细胞中的作用及机制研究 2.1IL-33因子刺激D407细胞后，ST2L mRNA表达显著增加(P 0.05)，并随着IL-33刺激浓度的增加而增加，且在100ng/ml IL-33刺激时表达量最高。采用流式细胞术检测D407细胞表面受体表达结果显示：D407细胞表面ST2L表达阳性，且在100ng/ml IL-33因子刺激细胞16h后表达上调。 2.2采用定量PCR及ELISA检测IL-33因子刺激D407细胞后炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α mRNA及蛋白水平表达。结果显示：20，50，100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后，炎症因子mRNA及蛋白水平表达均显著增加(P 0.05)，且随着IL-33因子刺激浓度的增加，炎症因子表达均逐渐增加，并在100ng/mlIL-33刺激时表达量最高。结果提示：IL-33刺激D407细胞后IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α因子表达上调。 2.3加入NF-κB，ERK1/2，JNK，，p38MAPK信号通路抑制剂，100ng/ml IL-33刺激D407细胞16h后，定量PCR和ELISA检测炎症因子mRNA及蛋白水平表达，结果显示：加入p38MAPK信号通路抑制剂后，IL-6表达显著下降；加入ERK1/2信号通路抑制剂后，IL-8表达显著下降；加入NF-κB信号通路抑制剂后，IL-1β表达显著下降；而加入JNK信号通路抑制剂后，TNF-α表达显著下降(P 0.05)。结果表明：IL-33因子刺激D407细胞后炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的产生是分别通过p38MAPK，ERK1/2，NF-κB以及JNK信号通路调控。 结论： 1.随着Aβ1-40刺激浓度的增加和时间的延长，人视网膜色素上皮细胞存活率逐渐下降。 2. β-淀粉样蛋白1-40刺激人视网膜色素上皮细胞后能够诱导IL-33因子转录及蛋白水平表达上调，且IL-33的产生主要是通过ERK1/2信号通路调控，而p38MAPK信号通路仅参与了IL-33转录水平的调控。 3.人视网膜色素上皮细胞表面表达ST2L受体且随着IL-33因子刺激浓度的增加ST2L表达量增加。 4. IL-33刺激人视网膜色素上皮细胞后能够上调炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表达。 5.在人视网膜色素上皮细胞中，IL-33因子分别通过p38MAPK，ERK1/2，NF-κB，JNK信号通路调控炎症因子IL-6，IL-8，IL-1β，TNF-α的表达。
[Abstract]:Objective:
1. in this study, IL-33 was used as the main research object to study its expression characteristics in human retinal pigment epithelial cells stimulated by beta amyloid (A beta).
2. preliminarily ascertain the role and mechanism of IL-33 in human retinal pigment epithelial cells.
Method锛

本文编号：1862693