β2糖蛋白Ⅰ抑制糖基化终末产物促猴视网膜内皮细胞血管新生的研究

发布时间：2018-06-24 03:24

  本文选题：糖尿病视网膜病变 + 血管新生　； 参考：《天津医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的： 糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病主要的微血管并发症之一,以血管新生为病变特征的增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)是糖尿病患者致盲的重要原因。已有研究表明糖基化终末产物(AGEs)水平与增殖性糖尿病视网膜病变严重程度呈正相关关系,即AGEs可能参与PDR发病。我们前期研究结果提示第V结构域缺失型β2糖蛋白Ⅰ(p2-GPI Domain I-IV)可抑制人脐静脉内皮细胞血管新生。本研究以猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)为研究对象,旨在探讨： 1.DI-IV对AGEs促RF/6A血管新生作用的影响； 2.DI-IV影响AGEs促RF/6A血管新生作用的机制。 方法： 1.培养RF/6A细胞。实验共分为5组：①NC组为对照组不加干预因素；②GEs组加入100μg/ml AGEs;③10nM DI-IV组加入100μg/ml AGEs及10nM DI-Ⅳ;④100nM DI-IV组加入100μg/ml AGEs及100nM DI-IV；⑤400nM DI-Ⅳ组加入100μg/ml AGEs及400nM DI-IV。 2.分别用MTS法、“伤口愈合”实验和体外Matrigel法研究不同浓度DI-IV对AGEs促RF/6A细胞增殖、细胞迁移以及新生血管形成的影响。 3.用实时定量PCR法研究DI-IV对AGEs于预下RF/6A VEGF受体VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2(KDR) mRNA表达的影响。 4.用Western Blot法研究DI-IV对AGEs干预下RF/6A VEGF细胞内信号转导途径关键蛋白Akt蛋白磷酸化的影响。 结果： 1. AGEs能明显刺激RF/6A细胞增殖(p0.05),此作用能被不同浓度DI-IV所抑制,其中10nM和400nM DI-Ⅳ的抑制作用最强(p0.01)。 2. AGEs明显增加RF/6A向裸露区迁移率达1.55倍(p0.01),加入不同浓度DI-IV后,这种迁移受到不同程度抑制,其中400nM DI-IV的抑制作用最强,高达47.6%(p0.05) 3. AGEs能明显促进RF/6A体外血管形成达70%(p0.01),加入不同浓度DI-IV,此血管形成受到不同程度地抑制,其中400nM DI-IV的抑制作用最大,高达27.4%(p0.05) 4. AGEs能明显降增加VEGFR-2mRNA表达量(p0.01),不同浓度DI-IV均能抑制其表达,400nM DI-IV的抑制作用最强(p0.01)。各组间VEGFR-1mRNA表达量相当,没有统计学差异。 5. AGEs干预细胞后,明显增加Akt蛋白磷酸化(p0.05),不同浓度DI-IV可不同程度地抑制其磷酸化(p0.01) 结论： 1. AGEs能促进RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成,可能机制为增加VEGFR-2表达,活化Akt以及下游信号转导通路。 2. DI-Ⅳ能拮抗AGEs促RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成的作用,可能的机制为拮抗VEGF/VEGFR-2/Akt信号转导通路。 3. VEGFR-1在RF/6A细胞增殖、迁移及管腔形成过程中,作用甚微。
[Abstract]:Objective: diabetic retinopathy (Dr) is one of the main microvascular complications of diabetes mellitus. Proliferative diabetic retinopathy (PDR) characterized by angiogenesis is an important cause of blindness in diabetic patients. Studies have shown that the level of advanced glycation end products (ages) is positively correlated with the severity of proliferative diabetic retinopathy, that is, ages may be involved in the pathogenesis of PDR. Our previous study suggested that 尾 2-GPI Domain I-IV (p2-GPI Domain I-IV) could inhibit angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The purpose of this study was to investigate the effects of DI-IV on the angiogenesis of ages, and the mechanism of DI-IV on angiogenesis induced by ages. Methods: 1. RFR / 6A cells were cultured. The experiment was divided into 5 groups: control group: 1: 1NC group: control group without intervention factor: group 2GEs: 100 渭 g/ml ages 310nM DI-IV group added 100 渭 g/ml ages and 10nM DI- 鈪，

本文编号：2059790