调控HIF-1α对鼻黏膜上皮细胞生长因子表达的影响

发布时间：2018-07-09 13:24

  本文选题：鼻黏膜 + RNA干扰　； 参考：《南京医科大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的 研究采用短发夹RNA(shRNA)特异性沉默人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells, HNEC)缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α HIF-1α),观察其对HNEC表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、转化生长因子(transforming growth factor, TGF)β1、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF/fibroblast growth factor-2,FGF-2)三种生长因子的影响。方法取因鼾症行下鼻甲切除术患者的下鼻甲黏膜,体外培养原代细胞,体外设计合成以腺病毒为载体GFP标记的shRNA(包括ad-HIF shRNA及ad-HIF shRNA-neg).将细胞分为空白对照组、无义寡核苷酸阴性对照组(ad-HIF shRNA-neg)、ad-HIF shRNA干扰组、低氧培养组。蛋白质免疫印迹试验Western blot技术检测转染病毒后HNEC中HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白的表达情况；RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的mRNA的表达情况。结果转染ad-HIF shRNA-neg前后,HIF-1α、VEGF、TGF-β1、bFGF的蛋白差异(q1=1.3167; q2=0.7513; q3=0.3251; q4=0.6592)及其mRNA差异(q1=2.3514; q2=37.0480; q3=17.1131; q4=1.0917)均无统计学意义(p0.05)。与阴性对照组及空白对照组相比,转染ad-HIF shRNA后,]BF-1α表达蛋白下降40%(q=31.4690),mRNA表达下降39%(q=16.5900),差异均有统计学意义(p0.05)；同时VEGF. TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之下降,蛋白差异(q1=19.1571；q2=33.8090；q3=45.8940)及mRNA差异(q1=22.3920；q2=17.8800;q3=11.5991)均有统计学意义(p0.05)；与阴性对照组及空白对照组相比,低氧培养HNEC,其HIF-1α表达蛋白升高50%(q=32.3540),mRNA表达升高46%(q=15.4570)差异均有统计学意义(p0.05)；同时VEGF.TGF-β1、bFGF的蛋白及mRNA表达也随之升高,蛋白差异(q1=20.2410;q2=35.2010;q3=47.3150)及mRNA差异(q1=21.4713；q2=18.3710；q3=10.3651)均有统计学意义(p0.05)。结论：特异性阻断HNEC的HIF-1α表达能够有效地抑制其VEGF, TGF-β1和bFGF的表达;低氧培养使HNEC中HIF-1α表达升高VEGR TGF-β1和bFGF的表达随之升高。表明HNEC中HIF-1α可能通过直接或间接途径调控着VEGF、 bFGF和TGF-β1的表达。
[Abstract]:Objective to study the expression of vascular endothelial growth factor (vascular endothelial growth factor,), transforming growth factor (transforming growth factor,) 尾 1 and alkaloids in human nasal epithelial cells (human nasal epithelial cells, HNECs) specifically silenced by short hairpin RNA (shRNA), and the expression of hypoxia inducible factor-1 伪 (hypoxia inducible factor-1 伪 HIF-1 伪 HIF-1 伪 in HNECs was observed. Effects of (basic fibroblast growth factor, bFGF / fibroblast growth factor-2 FGF-2). Methods the mucous membrane of inferior turbinate of patients with snoring underwent inferior turbinate resection was used to culture primary cells in vitro. In vitro, shRNA labeled by adenovirus was designed and synthesized (including ad-HIF shRNA and ad-HIF shRNA-neg). The cells were divided into blank control group, ad-HIF shRNA-neg negative control group and hypoxia culture group. Western blot assay was used to detect the expression of HIF-1 伪 -VEGF- 尾 _ 1bFGF protein in HNEC. The expression of HIF-1 伪 VEGF- 尾 _ 1bFGF mRNA was detected by reverse transcription chain reaction (HIF-1 伪 VEGF- 尾 _ 1bFGF). Results before and after transfection of ad-HIF shRNA-neg, there was no significant difference in hIF-1 伪 -VEGF- 尾 1bFGF protein (q1p1.3167; Q2O0.7513; q3O0.3251; q4n0.6592) and its mRNA difference (q12.3514; q237.0480; q3m1131; q4n1.0917) (p0.05). Compared with the negative control group and the blank control group, the expression of] BF-1 伪 mRNA decreased by 40% (ql31. 4690) after transfection of ad-HIF shRNA by 39% (qf16. 5900), the difference was statistically significant (p0.05), and the expression of VEGF- 伪 decreased by 39% (p0.05). The protein and mRNA expression of TGF- 尾 _ 1bFGF also decreased, and the protein difference (q1 ~ (19.1571) ~ (33. 8090) and mRNA (Q _ (1) 22. 3920 ~ (17. 8800) Q _ (3) and (11. 5991) were significant (p0.05), compared with negative control group and blank control group, the difference of TGF- 尾 _ 1bFGF protein and mRNA was significant (p0.05), compared with negative control group and blank control group, the expression of TGF- 尾 _ 1bFGF was significantly lower than that of negative control group and blank control group. In hypoxic HNECs, the expression of HIF-1 伪 protein increased by 50% (qf32.3540) and increased by 46% (ql15.4570), and the protein and mRNA expression of VEGF.TGF- 尾 _ 1nbFGF was also increased (p0.05), the difference of protein (q120.2410q235.2010Q3N3FN 47.3150) and mRNA (q121.4713Q2O18.3710q310q310.3651) was significant (p0.05). Conclusion: specifically blocking the expression of HIF-1 伪 in HNEC can effectively inhibit the expression of VEGF-, TGF- 尾 1 and bFGF in HNEC, and hypoxia culture can increase the expression of HIF-1 伪 and bFGF in HNEC with the increase of VEGR TGF- 尾 1 and bFGF. It is suggested that HIF-1 伪 may regulate the expression of VEGF, bFGF and TGF- 尾 1 directly or indirectly in HNEC.
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R765.21

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本文编号：2109504