Myh14在听觉系统中的功能研究

发布时间：2018-07-11 21:26

  本文选题：Myh14 + 噪声性耳聋　； 参考：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：Myh14编码非肌肉肌球蛋白Ⅱ重链14(NMHCⅡC),是肌球蛋白家族的一员,参与许多细胞运动过程,如离子通道门控、细胞器易位以及细胞骨架重排。Myh14突变会导致DNFA4型耳聋。有研究表明,Myh14是一个噪声性耳聋易感基因的候选基因。然而,Myh14在听觉系统和噪声性耳聋中的作用目前尚不清楚。本课题的研究目的在于研究Myh14在听觉系统中的作用以及验证其是否与噪声性耳聋有关,以希望阐明其生物学功能以及引起噪声性耳聋分子机制,对DNFA4型耳聋的发病机制以及噪声性耳聋的预防与治疗提供科学依据。本研究利用CRISPR-Cas9技术,在CBA/CaJ品系的小鼠中成功制作了Myh14基因敲除小鼠模型。通过对Myh14基因敲除小鼠模型的表型分析和功能研究,我们对Myh14在听觉系统中的作用进行了探讨。本研究通过基底膜铺片免疫荧光染色,检测MYH14在耳蜗上皮细胞中的定位,结果表明MYH14定位于毛细胞与相邻细胞之间的顶端连接复合物处。本研究通过耳蜗石蜡切片HE染色观察3月龄小鼠耳蜗的形态变化,结果显示Myh14基因敲除型小鼠耳蜗形态没有异常。利用ABR检测小鼠听力变化,Myh14基因敲除小鼠在5月龄时开始出现听力损失。通过基底膜铺片免疫荧光染色发现5月龄的Myh14基因敲除小鼠出现底回外毛细胞丢失,通过对外毛细胞丢失百分比统计,发现耳蜗底回的外毛细胞丢失具有统计学意义。通过免疫印迹法检测耳蜗中MYH9和MYH10蛋白的表达水平,得知在Myh14基因敲除型小鼠中MYH10的表达量明显升高,MYH9的表达量没有变化。通过建立噪声后暂时性听力阈移小鼠模型,Western Blot检测噪声前后不同时间段的小鼠耳蜗MYH14蛋白的表达,我们发现MYH14在耳蜗中的表达是噪声依赖性的。通过对噪声小鼠模型在噪声前后不同时间段ABR测听,与野生型相比,Myh14敲除型小鼠无论是混音还是短纯音都不能完全恢复,表明突变型小鼠的听力更容易受到高强度噪声的影响。通过对噪声后2周的噪声小鼠模型耳蜗基底膜整封染色,观察到在噪声刺激后2周的Myh14敲除型小鼠比野生型小鼠出现明显更多的毛细胞丢失,通过对外毛细胞丢失百分比统计,表明Myh14基因敲除型小鼠的外毛细胞丢失具有统计学意义。本研究建立的Myh14基因敲除型小鼠为研究Myh14基因在听觉系统的功能提供了良好的动物模型。本研究的结果表明,Myh14基因敲除型小鼠直到5月龄才出现轻微的高频听力阈移,这很可能是在Myh14基因敲除型小鼠中其同一家族的Myh10互补了它的部分功能。Myh14的表达是噪声依赖性的,CBA/CaJ品系的小鼠在受到噪声刺激时,Myh14很可能对耳蜗起到一定的保护作用,从而使耳蜗免受噪声引起的损伤。这些结果进一步证明了 Myh14很可能是一个噪声性耳聋易感基因。
[Abstract]:Myh14 encodes non-muscular myosin 鈪，

本文编号：2116381