RNA干扰NF-κB p65、STAT3基因增强尼妥珠单抗在下咽癌FaDu细胞的抗肿瘤活性研究

发布时间：2017-04-11 02:05

  本文关键词：RNA干扰NF-κB p65、STAT3基因增强尼妥珠单抗在下咽癌FaDu细胞的抗肿瘤活性研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)的发生、发展是多种抑癌基因异常,同时伴随多条增殖相关的分子通路持续性激活的过程。其中研究最多的是表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)通路,并且EGFR的高表达与疾病的预后呈负相关。EGFR的靶向治疗或实验研究主要有：单克隆抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂。尽管EGFR的靶向治疗提高了进展期以及复发肿瘤的生存期,但这部分病人的治疗效果仍然很差。EGFR靶向治疗耐药性机制尚未完全明确,然而下游分子信号通路过度激活可能是耐药机制之一。我们试图通过联合阻断下游的NF-κB以及STAT-3,进一步促进EGFR单克隆抗体尼妥珠诱导的下咽癌Fadu细胞系细胞凋亡,抑制细胞增殖。目的探究联合抑制NF-κB p65, STAT-3基因的表达增强尼妥珠单抗对下咽癌Fadu田胞系增殖的抑制作用,促进细胞凋亡。方法1向Fadu田胞中加入尼妥珠单抗：Oug/mL,50 ug/mL, ug/mL,100 ug/mL, 200ug/mL,72小时后蛋白免疫印迹法检测EGFR, NF-κB p65, STAT-3的表达。针对NF-κB p65和STAT-3基因分别筛选4条拟干扰靶点,分别构建这两种基因的shRNA真核表达载体,以及一条不针对任何序列的阴性对照表达载体shRNA NC。利用脂质体转染shRNA至293T细胞,筛选出具有干扰效果的真核表达载体。2将筛选出的质粒分为5组：①脂质体(1 ug/mL)+shRNA p65;②脂质体(1 ug/mL)+shRNA STAT-3; ③脂质体(1 ug/mL)+shRNA p65、STAT-3;④脂质体(1 ug/mL)+shRNANC;⑤shRNA p65、STAT-3+尼妥珠单抗(100ug/mL)。转染48小时后蛋白免疫印迹法检测EGFR,NF-κB P65、STAT-3蛋白的表达,于转染48,72,96小时后检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期。结果1加入尼妥珠单抗后Fadu细胞系EGFR的表达下降,同时NF-κB p65、 STAT-3的表达明显增加,并且呈剂量依赖型。成功构建重组质粒表达载体pGPU6/GFP/Hygro-p65、pGPU6/GFP/Neo-STAT-3以及pGPU6/GFP/Hygro-NC, NF-κB p65、STAT-3与对照组mRNA相比,分别下降至53.2%和47.4%。。2 NF-κB p65、STAT-3靶向shRNA转染后显著降低了相应蛋白的表达(p0.05)。同时干扰NF-κB p65、STAT-3基因表达组较单独组均更加显著抑制了FaDu细胞增殖促进了凋亡(p0.01)。与联合干扰组相比,加入尼妥珠单抗后较进一步促进凋亡(p0.01)。结论同时干扰基因对FaDu细胞生长有显著抑制作用,提示NF-κB p65、 STAT-3可能作为下咽癌基因治疗的联合药物靶点,并且增强了尼妥珠单抗的抗肿瘤活性。
【关键词】：头颈鳞癌 下咽癌 NF-κB p65 STAT-3
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.91;R739.63
【目录】：

• 英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-27
• 结果27-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-57
• 参考文献52-57
• 攻读学位期间发表文章情况57-58
• 个人简介58-59
• 致谢59

【共引文献】

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本文编号：298047