通过UV-X角膜交联机对兔眼角膜交联的实验研究探讨角膜交联术对酶消化的抑制作用

发布时间：2017-04-15 04:09

  本文关键词：通过UV-X角膜交联机对兔眼角膜交联的实验研究探讨角膜交联术对酶消化的抑制作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分UV-X角膜交联机对兔眼角膜交联效果的实验研究目的应用UV-X角膜交联机对兔眼角膜进行角膜交联及相关实验研究,验证该仪器的作用效果并作出评价,为下一步实验打下基础。方法10只(20眼)日本大耳白兔,1只为正常对照组,9只随机取一眼为实验组,另一眼为对照组,双眼均刮去角膜上皮,实验组去上皮后用UV-X角膜交联机行交联术;术后1天、3天、7天各取3只兔子处死,取双眼角膜,并对取下的角膜组织作光镜(HE染色、VG染色)及电镜观察。结果实验组每只眼睛都顺利完成角膜交联术。HE染色示交联后角膜均有水肿、炎性反应,但随着时间增长程度逐渐减轻,至术后第7天,角膜无明显水肿、炎性反应亦明显减轻。对照组炎症及水肿情况均较实验组轻,但其恢复较实验组慢。VG染色按照灰度差异将胶原纤维进行定量分析示,实验组胶原纤维的密度明显高于对照组,且经过交联的角膜靠近上皮层的纤维密度更高。电镜示实验组术后角膜细胞稍肿胀,细胞间连接较紧密,纤维排列较整齐,对照组细胞肿胀,内容物除个别内质网可见外其余溶解,细胞核增大,密度降低,胶原纤维间距增加。结论应用UV-X角膜交联机进行角膜交联术稳定、安全、有效。经过该仪器交联过的角膜较未交联过的角膜更厚,纤维排列更整齐、密集。第二部分角膜交联术对酶消化抑制作用的实验研究目的对比观察三种蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和胶原蛋白酶)对交联和未交联的兔眼角膜进行消化,验证角膜交联术对酶消化的抑制作用。方法9只(18眼)日本大耳白兔,随机分为3组(每组3只),随机取一眼为实验组,另一眼为对照组,实验组行角膜交联术,对照眼仅刮去角膜上皮,之后立即将兔子处死并取双眼角膜,分别将取好的角膜放入配好的酶溶液中,并置于酶的最适温度,观察并记录消化过程角膜的形态变化及角膜被完全消化所用的时间。根据上一步实验情况再取18只(36眼)日本大耳白兔,每组6只(12眼),分别在消化的第1、3、7天随机各取出2只兔子剩余的角膜组织并作光镜观察(HE染色)。结果角膜完全消化的时间为:胃蛋白酶实验组分别为66天、65天、59天,平均63.33±2.19天,对照组分别为61天、59天、52天,平均57.33±2.73天,实验组明显长于对照组(P0.05);胰蛋白酶实验组分别为4天、4天、4天,平均4.00天;对照组分别为3天、3天、2天,平均为2.67±0.33天,实验组明显长于对照组(P0.05);胶原蛋白酶实验组分别为7天、3天、5天,平均5±1.15天;对照组分别为2天、2天、2天,平均2.00天,实验组明显长于对照组(P0.05)。角膜在酶溶液中随着时间变化皱缩、变薄最后溶解,实验组的变化均稍慢于对照组。HE染色示随着角膜在酶溶液中浸泡时间的增加,细胞逐渐肿胀、结构消失,角膜上皮逐渐变薄,但实验组变化均慢于对照组。结论核黄素-角膜交联术能显著提高角膜对酶消化作用的抵抗力。
【关键词】：角膜交联术 角膜交联机 角膜厚度 胶原纤维 酶 消化 抑制
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R779.6
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 缩略词表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 UV-X角膜交联机对兔眼角膜交联效果的实验研究15-27
• 材料与方法15-17
• 一、实验对象15
• 二、仪器与试剂15-16
• 三、方法16-17
• 结果17-19
• 一、UV-X 紫外 LED 照射仪进行角膜交联的结果17
• 二、兔眼角膜的光镜结果17-19
• 讨论19-25
• 一、角膜交联术(CXL)的基本原理及研究进展19-21
• 二、中医对角膜病及角膜交联术的认识21-25
• 附图25-27
• 第二部分 角膜交联术对酶消化抑制作用的实验研究27-39
• 材料与方法27-30
• 一、实验对象27
• 二、仪器与试剂27-28
• 三、方法28-30
• 结果30-32
• 一、兔眼角膜消化过程形态变化及完全消化时间30
• 二、兔眼角膜的光镜（HE 染色）结果30-32
• 讨论32-38
• 一、角膜组织的生理病理及其与酶的关系32-35
• 二、角膜交联术（CXL）对酶消化的抑制作用35-38
• 附图38-39
• 结语39-40
• 参考文献40-45
• 附录 综述45-56
• 参考文献53-56
• 致谢56-57

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