MST4在角膜上皮细胞抗真菌免疫反应中的作用及调控机制
发布时间：2021-04-10 18:47
目的:研究丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4（mammalian Ste20-like kinase 4,MST4）在角膜上皮细胞抗烟曲霉菌免疫反应中的作用和分子机制。方法:1、烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,建立小鼠真菌性角膜炎动物模型,观察感染不同时间点后小鼠角膜的临床评分,采用Western blot法检测正常小鼠角膜和感染12小时、1天、3天、5天的小鼠角膜中MST4蛋白的表达。烟曲霉菌菌丝刺激永生化人角膜上皮细胞,应用Western blot法检测正常和烟曲霉菌刺激12小时、24小时的人角膜上皮细胞中MST4蛋白的表达。采用免疫荧光染色检测正常小鼠角膜和感染3天的小鼠角膜中MST4表达及定位。2、给予不同浓度外源性的MST4重组蛋白（2、5、10ng/ml）预处理人角膜上皮细胞2小时后,烟曲霉菌刺激人角膜上皮细胞12小时和24小时,采用PCR法和ELISA法检测各组人角膜上皮细胞中IL-1β、IL-6和IL-8 m RNA和蛋白的表达。3、给予Dectin-1配体凝胶多糖（Curdlan）或Dectin-1抑制剂昆布多糖（Laminarin）预处理人角膜上皮细胞10小时后,烟曲霉菌...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MST4抑制烟曲霉菌感染的角膜上皮细胞中促炎细胞因子的产生；不同浓度的MST4重组蛋白（2、5、10ng/mL）预处理人角膜上皮细胞2小时后，烟曲霉菌刺激细胞12小时或24小时
图 3 烟曲霉菌通过 Dectin-1 诱导角膜上皮细胞产生 MST4；Laminarin（300μg/mL）或 Curdlan（200μg/mL）预处理人角膜上皮细胞 10 小时后，加入烟曲霉刺激细胞 24 小时。通过 Western blot 检测细胞中 MST4 的蛋白表达（A，B）。（* p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001）。
图 4 MST4 抑制 Dectin-1 介导的促炎细胞因子产生；不同浓度的 MST4 重组蛋白（2、5、10ng/mL）预处理人角膜上皮细胞 2 小时后，Curdlan 刺激（200μg/mL）人角膜上皮细胞 12 小时或 24 小时。不同浓度的 MST4 重组蛋白（2、5ng/mL）预处理 RAW264.7 细胞 2 小时后，Curdlan（100μg/mL）刺激RAW264.7 细胞 8 小时。通过 RT-PCR（A，C，E）和 ELISA（B，D，F）检测人角膜上皮细胞中 IL-1β、IL-6 和 IL-8 的 mRNA 和蛋白质水平。通过 RT-PCR（G，H）检测 RAW264.7 细胞中 IL-1β 和 IL-6 的 mRNA 水平。（* p <0.05，** p <0.01，*** p<0.001）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]固有免疫相关模式识别受体研究进展[J]. 何邵平,贺建华,陈佳亿,陈福,欧淑琦. 动物营养学报. 2017(11)
[2]Hippo信号通路结构生物学研究进展[J]. 胡立桥,周兆才,田伟. 遗传. 2017(07)
[3]肿瘤坏死因子受体相关因子6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4在未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎发病中的机制[J]. 陈丹丹,卢丹. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(21)
[4]Dectin-1 agonist curdlan modulates innate immunity to Aspergillus fumigatus in human corneal epithelial cells[J]. Cheng-Cheng Zhu,Gui-Qiu Zhao,Jing Lin,Li-Ting Hu,Qiang Xu,Xu-Dong Peng,Xue Wang,Sheng Qiu. International Journal of Ophthalmology. 2015(04)
[5]Inhibitory Effects of Parthenolide on the Activity of NF-κB in Multiple Myeloma via Targeting TRAF6[J]. 孔繁聪,张静琼,曾辰,陈文兰,任文翔,闫国鑫,王红祥,李秋柏,陈智超. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2015(03)
[6]Dectin-1 expression at early period of Aspergillus fumigatus infection in rat’s corneal epithelium[J]. Cheng-Ye Che,Cui Li,Ang Gao,Jing Lin,Li-Li Zhang,Qiang Xu,Qian Wang,Gui-Qiu Zhao. International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2013(01)
[7]真菌性角膜炎免疫机制研究进展[J]. 李娜,赵桂秋. 中华眼科杂志. 2011 (04)
本文编号：3130152
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MST4抑制烟曲霉菌感染的角膜上皮细胞中促炎细胞因子的产生；不同浓度的MST4重组蛋白（2、5、10ng/mL）预处理人角膜上皮细胞2小时后，烟曲霉菌刺激细胞12小时或24小时
图 3 烟曲霉菌通过 Dectin-1 诱导角膜上皮细胞产生 MST4；Laminarin（300μg/mL）或 Curdlan（200μg/mL）预处理人角膜上皮细胞 10 小时后，加入烟曲霉刺激细胞 24 小时。通过 Western blot 检测细胞中 MST4 的蛋白表达（A，B）。（* p <0.05，** p <0.01，*** p <0.001）。
图 4 MST4 抑制 Dectin-1 介导的促炎细胞因子产生；不同浓度的 MST4 重组蛋白（2、5、10ng/mL）预处理人角膜上皮细胞 2 小时后，Curdlan 刺激（200μg/mL）人角膜上皮细胞 12 小时或 24 小时。不同浓度的 MST4 重组蛋白（2、5ng/mL）预处理 RAW264.7 细胞 2 小时后，Curdlan（100μg/mL）刺激RAW264.7 细胞 8 小时。通过 RT-PCR（A，C，E）和 ELISA（B，D，F）检测人角膜上皮细胞中 IL-1β、IL-6 和 IL-8 的 mRNA 和蛋白质水平。通过 RT-PCR（G，H）检测 RAW264.7 细胞中 IL-1β 和 IL-6 的 mRNA 水平。（* p <0.05，** p <0.01，*** p<0.001）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]固有免疫相关模式识别受体研究进展[J]. 何邵平,贺建华,陈佳亿,陈福,欧淑琦. 动物营养学报. 2017(11)
[2]Hippo信号通路结构生物学研究进展[J]. 胡立桥,周兆才,田伟. 遗传. 2017(07)
[3]肿瘤坏死因子受体相关因子6、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4在未足月胎膜早破合并绒毛膜羊膜炎发病中的机制[J]. 陈丹丹,卢丹. 中华临床医师杂志(电子版). 2016(21)
[4]Dectin-1 agonist curdlan modulates innate immunity to Aspergillus fumigatus in human corneal epithelial cells[J]. Cheng-Cheng Zhu,Gui-Qiu Zhao,Jing Lin,Li-Ting Hu,Qiang Xu,Xu-Dong Peng,Xue Wang,Sheng Qiu. International Journal of Ophthalmology. 2015(04)
[5]Inhibitory Effects of Parthenolide on the Activity of NF-κB in Multiple Myeloma via Targeting TRAF6[J]. 孔繁聪,张静琼,曾辰,陈文兰,任文翔,闫国鑫,王红祥,李秋柏,陈智超. Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2015(03)
[6]Dectin-1 expression at early period of Aspergillus fumigatus infection in rat’s corneal epithelium[J]. Cheng-Ye Che,Cui Li,Ang Gao,Jing Lin,Li-Li Zhang,Qiang Xu,Qian Wang,Gui-Qiu Zhao. International Journal of Ophthalmology（English Edition）. 2013(01)
[7]真菌性角膜炎免疫机制研究进展[J]. 李娜,赵桂秋. 中华眼科杂志. 2011 (04)
本文编号：3130152
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