小牛血去蛋白提取物对苯扎氯铵诱导小鼠干眼的疗效和机制

发布时间：2017-04-18 10:11

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【摘要】：目的探讨小牛血去蛋白提取物滴眼液(DCBE)对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼的治疗作用及机制。方法选用C57BL/6雄性小鼠60只(120眼),使用0.2%的苯扎氯铵溶液滴眼在人工干燥环境下诱导干眼。通过观测泪膜破裂时间、角膜荧光素钠染色、眼表炎症指数、泪液分泌量(酚红棉线长度)的相应指标,对比正常小鼠的同类眼表数据。在诱导的第14天,选择出符合入组指标的小鼠,随机分成A、B、C、D四组。A组为干眼对照组,B、C、D组分别为溶剂对照组,小牛血去蛋白提取物滴眼液治疗组,小牛自体血清治疗组。治疗后第0、1、4、7天进行泪眼分泌量、角膜炎症程度、泪膜破裂时间及角膜上皮荧光素钠染色评估。治疗结束后摘取小鼠眼球,进行HE及过碘酸-希夫(PAS)染色,Ki-67免疫组化,K10及MUC1免疫荧光标记,组织原位凋亡检测角膜上皮凋亡情况;以及Western blot检测角结膜组织中K10表达水平,分析各组差异。结果经筛选共72只眼入选进行治疗实验,每组18只眼。对所有小鼠眼睛进行分析和测算后:使用小牛血去蛋白提取物的小鼠相较于其他组泪膜破裂时间延长,角膜荧光素染色范围缩小,评分下降,眼表炎症指数有一定改善,泪液分泌量无明显变化。小牛血去蛋白提取物亦能能减少角膜上皮细胞凋亡、减轻角膜鳞状上皮化生(K10表达下降)、加快角膜上皮修复速度(Ki-67表达上升)和增加杯状细胞数量(MUC5AC),稳定泪膜。结论小牛血去蛋白提取物对苯扎氯铵诱导的小鼠干眼动物模型有一定的治疗作用,作用机制可能与DCBE能够促进角膜上皮修复,增加角膜粘蛋白的表达,维持泪膜稳定等因素有关。
【关键词】：干眼 治疗 小牛血去蛋白提取物 小鼠 苯扎氯铵
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R777.34
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第1章前言10-12
• 第2章材料与方法12-16
• 2.1 主要设备和耗材12-13
• 2.2 主要耗材与试剂13-14
• 2.3 小鼠干眼模型制作14-16
• 第3章实验过程16-24
• 3.1 小鼠干眼模型临床指标评估16-22
• 3.1.1 泪膜破裂时间（Tear film break-up time, TBUT）16
• 3.1.2 角膜荧光素染色16-17
• 3.1.3 炎症指数17
• 3.1.4 泪液分泌量检测17
• 3.1.5 冰冻切片17
• 3.1.6 苏木素-伊红染色（HE染色）17-18
• 3.1.7 石蜡切片&过碘酸-希夫染色（periodic acid-schiff，PAS染色）18-19
• 3.1.8 组织原位凋亡检测19
• 3.1.9 间接免疫荧光染色法19-20
• 3.1.10 免疫组织化学染色法20-21
• 3.1.11 Western Blot蛋白检测21-22
• 3.2 统计分析22-24
• 第4章结果24-30
• 4.1 0.2%BAC+人工干燥环境诱导小鼠干眼模型结果24
• 4.2 DCBE能提高泪膜稳定性，，修复上皮缺损24-26
• 4.3 DCBE能减轻角膜鳞状上皮化生26-27
• 4.4 DCBE能减少角膜上皮细胞凋亡27
• 4.5 DCBE能加快角膜上皮修复速度27-28
• 4.6 DCBE增加杯状细胞数量28-30
• 第5章讨论30-34
• 第6章结论34-36
• 参考文献36-40
• 综述40-46
• 参考文献43-46
• 附录46-48
• 作者攻读学位期间的科研成果48-50
• 致谢50

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本文编号：314631