RH-ES对氧诱导视网膜病变大鼠视网膜新生血管及VEGF、VEGFR-2 mRNA表达的影响

发布时间：2017-04-18 19:01

  本文关键词：RH-ES对氧诱导视网膜病变大鼠视网膜新生血管及VEGF、VEGFR-2 mRNA表达的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:建立氧诱导视网膜病变(Oxygen induced retinopathy,OIR)动物模型,研究重组人血管内皮抑素(recombinant human endostatin,rh-ES)对氧诱导视网膜病变的作用及可能的机制,为ROP的临床治疗提供理论依据。通过观察新生血管和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor reportor 2,VEGFR-2)mRNA在各组大鼠视网膜中的变化规律,探讨rh-ES、VEGF、VEGFR-2 mRNA、高氧及视网膜新生血管之间的关系。方法:7日龄新生SD大鼠40只,随机分为正常对照组8只、高氧对照组8只、药物干预组24只。药物干预组根据药物剂量的不同分为大剂量组8只、中剂量组8只、小剂量组8只。正常对照组幼鼠仅放置于空气中饲养(氧浓度21%±1%)。高氧对照组于鼠龄7d时放置于高氧环境中(氧浓度75%±2%)饲养5天后再放回空气中饲养。药物干预组于鼠龄7d时放置于高氧环境中(氧浓度75%±2%)饲养5天后再放回正常空气中饲养5天,并在鼠龄12日开始给药,给药途径为腹腔注射法,用药时间为5天,给药剂量(rh-ES)为小剂量组3mg/kg/d、中剂量组6mg/kg/d、大剂量组9mg/kg/d。各组大鼠在鼠龄17d时,进行视网膜组织切片HE染色计数突破视网膜内界膜血管内皮细胞核数,应用实时荧光定量PCR法(Real time RT-PCR)检测各组视网膜中VEGF及VEGFR-2 mRNA表达量。结果:(1)视网膜组织切片HE染色平均每张切片突破视网膜内界膜内皮细胞核数目:正常对照组为(0.95±0.06)个,高氧对照组为(23.30±1.75)个,小剂量组为(9.04±0.73)个,中剂量组为(6.67±1.02)个,大剂量组为(2.97±0.31)个,高氧对照组突破视网膜内界膜内皮细胞核数目多于rh-ES干预组及正常对照组,差异有显著统计学意义(P0.01),rh-ES干预组突破视网膜内界膜内皮细胞核数目随用药剂量增加而减少,差异有显著统计学意义(P0.01),rh-ES干预组与正常对照组比较,差异有显著统计学意义(P0.01)(2)高氧对照组VEGF及VEGFR-2 mRNA相对表达量高于正常对照组及rh-ES干预组,差异有统计学意义(P0.05),rh-ES干预组随用药剂量的增加,VEGF及VEGFR-2 mRNA相对表达量降低,差异有统计学意义(P0.05),rh-ES大剂量组VEGF及VEGFR-2 mRNA相对表达量与正常对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)(3)突破视网膜内界膜内皮细胞核数与VEGF及VEGFR-2 mRNA相对表达量呈正相关关系。结论:(1)OIR模型中VEGF及VEGFR-2 mRNA表达增高(2)VEGF及VEGFR-2mRNA相对表达量与新生血管数量呈正相关关系(3)rh-ES通过抑制VEGF及VEGFR-2 mRNA的表达来抑制新生血管的形成。
【关键词】：早产儿视网膜病变 血管内皮生长因子 重组人血管内皮抑素
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-9
• 摘要9-11
• ABSTRACT11-13
• 前言13-15
• 内容与方法15-25
• 1.研究内容15
• 2.材料方法15-20
• 2.1 实验动物与主要仪器及试剂15-16
• 2.2 实验高氧装置16-17
• 2.3 动物分组17
• 2.4 OIR模型的制备17-18
• 2.5 给药方法18
• 2.6 标本采集18-19
• 2.7 石蜡包埋19
• 2.8 切片19
• 2.9 HE染色19
• 2.10 内皮细胞核数目计数19-20
• 3.待测基因的提取与逆转录20-22
• 3.1 PCR技术简介20
• 3.2 RNA的提取20-21
• 3.3 RNA的纯化21
• 3.4总RNA纯度、浓度及完整性检测21-22
• 3.5 cDNA的合成22
• 4.实时荧光定量PCR22-24
• 4.1 扩增效率的检测22-23
• 4.2 引物特异性测试23-24
• 5.统计学方法选择24-25
• 结果25-34
• 1.各组大鼠不同天数存活数量25
• 2. 视网膜新生血管的定量结果（HE染色）25-27
• 3. RT-PCR结果27-34
• 3.1 RNA完整性鉴定27
• 3.2 扩增效率结果27-29
• 3.3 引物特异性分析29-30
• 3.4 RT-PCR相对定量结果分析30-34
• 讨论34-40
• 1. 高浓度氧气对未成熟视网膜的影响34-35
• 2.高氧诱导视网膜病变动物模型的建立35-36
• 3.缺氧、VEGF、VEGFR-2 及新生血管的关系36-37
• 4.VEGF与ROP的关系37
• 5.重组人血管内皮抑素抑制视网膜新生血管的机制37-39
• 6.给药方式及药物剂量39
• 7.问题与展望39-40
• 结论40-41
• 致谢41-42
• 参考文献42-48
• 综述48-67
• 参考文献60-67
• 作者简介（学习及工作经历、发表的学位文章）67

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