DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

发布时间：2021-06-16 10:23

　　目的探讨DNMT1蛋白是否通过沉默MEG3基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法通过转染pcDNA-DNMT1或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高（P<0.05）。转染了pcDNA-DNMT1的HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3表达量降低;转染了siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加（P<0.05）。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低（P<0.05）。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNM... 

【文章来源】：南方医科大学学报. 2020,40(09)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

DNMT1蛋白通过MEG3调控RB细胞增殖

CCK-8实验显示，转染了pc DNA-DNMT1的HXO-RB44细胞，72 h后相对细胞数量高于对照组1(P<0.05，图2C）；转染了si-DNMT1的SO-RB50细胞，72 h后相对细胞数量低于对照组2(P<0.05，图2C）。Ed U细胞增殖实验显示，pc DNA-DNMT1组Ed U阳性的HXO-RB44细胞比例高于对照组1(P<0.05，图2D);si-DNMT1组Ed U阳性的SO-RB50细胞比例低于对照组2(P<0.05，图2D）。

MEG3是第一个被发现具有肿瘤抑制功能的lnc RNA[17]，其在多种肿瘤中低表达，发挥着抑制细胞增殖，促进细胞凋亡的抑癌作用[18-24]。然而MEG3在RB中的作用仍不清楚。我们既往研究证实，MEG3作为一种抑癌基因，在视网膜母细胞瘤组织及细胞中亦处于失活状态，并发挥着促进细胞凋亡、抑制细胞增殖的作用[26-28]。而MEG3的低表达与DNA过甲基化密切相关，有研究发现MEG3在脑膜瘤组织中低表达，其启动子DNA甲基化的程度与肿瘤的侵袭生长有关[29-30]。有研究发现在人类无功能性垂体腺瘤中MEG3表达缺失，MEG3基因启动子的过甲基化状态与其表达缺失密切相关。Braconi等[31]在肝癌细胞中miR-29a可以通过下调DNA甲基转移酶1和3，降低MEG3基因启动子甲基化水平，进而促使MEG3表达增加。上述研究证实，在多种肿瘤中DNA过甲基化均可导致MEG3失活。然而在RB中MEG3基因启动子是否存在异常甲基化尚不清楚，因此在既往研究中，我们首先利用MS-PCR证实在RB肿瘤组织及细胞系中，MEG3基因启动子均处于甲基化状态；进一步用不同浓度的DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理RB细胞，然后利用qRT-PCR技术检测细胞中MEG3表达水平的变化，结果表明，在RB中MEG3基因的表达水平与其DNA甲基化水平呈显著负相关[25]。然而MEG3基因启动子异常甲基化的机制尚不清楚，本研究拟进一步对其进行探讨。图4 DNMT1蛋白通过MEG3调控RB细胞增殖

【参考文献】：
期刊论文
[1]lncRNA-MEG3通过P53途径介导视网膜母细胞瘤凋亡[J]. 高亚莉,陆晓和.  眼科新进展. 2017(04)
[2]MEG3抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖[J]. 高亚莉,李劲.  肿瘤. 2016(03)



本文编号：3232901