shRNA靶向沉默P2X7R表达对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt和Wnt/β-catenin通路的影响
发布时间：2021-08-19 23:38
目的探讨靶向P2X7受体（P2X7R）的小发夹RNA（shRNA）对人鼻咽癌HONE1细胞增殖、凋亡及信号通路的影响。方法根据预实验结果优化shRNA转染条件,将2条靶向抑制P2X7R基因的shRNA载体片段（shRNA-1、shRNA-2）分别高效转染HONE1细胞,同时设转染无义序列（Blank）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96h后采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测P2X7R表达水平以筛选抑制率高的转染载体用于后续试验。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡率,QPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平,Western blotting检测各组转染96 h后磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路和Wnt/β-连接素（β-catenin）通路中的蛋白变化。结果转染组的P2X7R mRNA水平均低于空转染组和对照组（P<0.05）,且选择干扰效率高的shRNA-1载体进行功能学研究;与空转染组和对照组比较,shRNA-1转染组的HON...
【文章来源】：临床肿瘤学杂志. 2016,21(09)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
shＲNA转染对各组P2X7Ｒ表达的影响
A:对照组;B:空转染组;C:shＲNA-1转染组图2P2X7ＲshＲNA-1转染96h后各组HONE1细胞凋亡率的流式细胞图表2P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞凋亡的影响(%)组别48h96h对照组4.55±1.126.71±1.24空转染组3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1转染组24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ对HONE1细胞凋亡相关基因的影响与空转染组和对照组比较，HONE1细胞经shＲNA-1转染靶向沉默P2X7Ｒ表达后促凋亡基因表达升高，而抗凋亡基因表达降低;shＲNA-1转染组48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和空转染组Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差异均无统计学意义(P＞0.05)。见图3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.05图3QPCＲ检测shＲNA-1转染48h后各组凋亡相关基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞相关通路蛋白的影响P2X7ＲshＲNA-1转染可抑制HONE1细胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。与空转染组和对照组比较，shＲNA-1转染组HONE1细胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图4。3讨论配体门控离子通道P2X7Ｒ是近年来研究非小细胞肺癌(NSCLC)靶向药物方面的热点之一，它是P2XＲ家族中独特的一员，三磷酸腺苷是其天然配·772·临床肿瘤学杂志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9
A:对照组;B:空转染组;C:shＲNA-1转染组图2P2X7ＲshＲNA-1转染96h后各组HONE1细胞凋亡率的流式细胞图表2P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞凋亡的影响(%)组别48h96h对照组4.55±1.126.71±1.24空转染组3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1转染组24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ对HONE1细胞凋亡相关基因的影响与空转染组和对照组比较，HONE1细胞经shＲNA-1转染靶向沉默P2X7Ｒ表达后促凋亡基因表达升高，而抗凋亡基因表达降低;shＲNA-1转染组48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和空转染组Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差异均无统计学意义(P＞0.05)。见图3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.05图3QPCＲ检测shＲNA-1转染48h后各组凋亡相关基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞相关通路蛋白的影响P2X7ＲshＲNA-1转染可抑制HONE1细胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。与空转染组和对照组比较，shＲNA-1转染组HONE1细胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图4。3讨论配体门控离子通道P2X7Ｒ是近年来研究非小细胞肺癌(NSCLC)靶向药物方面的热点之一，它是P2XＲ家族中独特的一员，三磷酸腺苷是其天然配·772·临床肿瘤学杂志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA干扰Dub3表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 崔巍,丁振,谷振芳,王军业. 临床肿瘤学杂志. 2015(11)
[2]鼻咽癌和肝癌联合筛查的流行病学及卫生经济学研究[J]. 全文,俞霞,吴标华,季明芳. 中山大学学报(医学科学版). 2014(04)
本文编号：3352356
【文章来源】：临床肿瘤学杂志. 2016,21(09)
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
shＲNA转染对各组P2X7Ｒ表达的影响
A:对照组;B:空转染组;C:shＲNA-1转染组图2P2X7ＲshＲNA-1转染96h后各组HONE1细胞凋亡率的流式细胞图表2P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞凋亡的影响(%)组别48h96h对照组4.55±1.126.71±1.24空转染组3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1转染组24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ对HONE1细胞凋亡相关基因的影响与空转染组和对照组比较，HONE1细胞经shＲNA-1转染靶向沉默P2X7Ｒ表达后促凋亡基因表达升高，而抗凋亡基因表达降低;shＲNA-1转染组48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和空转染组Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差异均无统计学意义(P＞0.05)。见图3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.05图3QPCＲ检测shＲNA-1转染48h后各组凋亡相关基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞相关通路蛋白的影响P2X7ＲshＲNA-1转染可抑制HONE1细胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。与空转染组和对照组比较，shＲNA-1转染组HONE1细胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图4。3讨论配体门控离子通道P2X7Ｒ是近年来研究非小细胞肺癌(NSCLC)靶向药物方面的热点之一，它是P2XＲ家族中独特的一员，三磷酸腺苷是其天然配·772·临床肿瘤学杂志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9
A:对照组;B:空转染组;C:shＲNA-1转染组图2P2X7ＲshＲNA-1转染96h后各组HONE1细胞凋亡率的流式细胞图表2P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞凋亡的影响(%)组别48h96h对照组4.55±1.126.71±1.24空转染组3.29±0.845.36±1.75shＲNA-1转染组24.37±2.93*#53.66±4.40*#注:与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.052.4shＲNA-1靶向沉默P2X7Ｒ对HONE1细胞凋亡相关基因的影响与空转染组和对照组比较，HONE1细胞经shＲNA-1转染靶向沉默P2X7Ｒ表达后促凋亡基因表达升高，而抗凋亡基因表达降低;shＲNA-1转染组48h的Bcl-2、Mcl-1mＲNA水平均降低，Bid、BaxmＲNA水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05);对照组和空转染组Bcl-2、Mcl-1、Bid和BaxmＲNA水平的差异均无统计学意义(P＞0.05)。见图3。A:Bcl-2;B:Mcl-1;C:Bid;D:Bax;与对照组比较，*P＜0.05;与空转染组比较，#P＜0.05图3QPCＲ检测shＲNA-1转染48h后各组凋亡相关基因的mＲNA水平2.5P2X7ＲshＲNA-1转染对HONE1细胞相关通路蛋白的影响P2X7ＲshＲNA-1转染可抑制HONE1细胞PI3K/Akt及Wnt/β-catenin通路的活化。与空转染组和对照组比较，shＲNA-1转染组HONE1细胞的PTEN水平升高，而p-Akt、p-β-cate-nin、CyclinD1及C-myc水平均降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图4。3讨论配体门控离子通道P2X7Ｒ是近年来研究非小细胞肺癌(NSCLC)靶向药物方面的热点之一，它是P2XＲ家族中独特的一员，三磷酸腺苷是其天然配·772·临床肿瘤学杂志2016年9月第21卷第9期ChineseClinicalOncology，Sep．2016，Vol．21，No．9
【参考文献】：
期刊论文
[1]RNA干扰Dub3表达对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 崔巍,丁振,谷振芳,王军业. 临床肿瘤学杂志. 2015(11)
[2]鼻咽癌和肝癌联合筛查的流行病学及卫生经济学研究[J]. 全文,俞霞,吴标华,季明芳. 中山大学学报(医学科学版). 2014(04)
本文编号：3352356
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