Der p2-A20纳米DNA疫苗的构建及其改善小鼠变应性鼻炎症状的研究
发布时间：2021-10-07 09:32
目的:通过构建pVAX1-Der p2-A20真核表达载体,并经聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolic acid）,PLGA]包载为PLGA-pVAX1-Der p2-A20（PpDA）纳米DNA疫苗,探讨其对重组屋尘螨Der p2变应原诱导的变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）模型小鼠的特异性免疫治疗效果及其机制,为AR的治疗策略提供新的思路。方法:（1）采用乳化溶液蒸发法制备PpDA,扫描电镜观察其形态学特点,体外细胞转染实验验证其在细胞中的表达。（2）大量诱导表达、纯化Der p2重组蛋白,采用ELISA和蛋白免疫印迹（Western blot）分析其免疫学特性。（3）50只健康雌性Balb/c小鼠,6-8W龄,随机分为5组,正常组（NC）、模型组（AR）、纳米疫苗治疗组（PpDA）、空白纳米治疗组（PLGA）和裸质粒pVAX1-Der p2-A20治疗组（pDA）。AR组、PpDA组、PLGA组和pDA组分别在第0,7,14天经腹腔注射100μg Der p2重组蛋白和15μg霍乱毒素（Cholera toxin,CT）进行致敏...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pVAX1-Derp2-A20（pDA）的部分测序图
重组质粒 pVAX1-Der p2-A20（pDA）的部分测encing map of recombinant plasmid pVAX1-Der p2-征封的纳米粒溶液外观呈乳白色，均质，半干燥后，为白色粉末，可溶于水，表明成功 SEM 下呈椭圆形、光滑的颗粒，外形完为（292±2.34）nm，结果见图 2。
遵义医科大学硕士学位论文 胡文会3.2.3 PpmDA 的体外表达体外细胞转染实验结果如图 3 所示，PpmDA转染组和 pmDA 转染组均能在激光共聚焦显微镜下检测到荧光。然而，空白 PLGA 组和 NC 组中未检测到荧光，表明质粒 pDA 在经 PLGA 包封后可以在细胞内表达，并保持其生物活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]锌指蛋白A20在气道过敏性疾病中的作用[J]. 胡文会,刘志强,胡田勇,马莉,张华,陈丹,邱书奇. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2018(20)
[2]调节性T细胞与哮喘（英文）[J]. Sheng-tao ZHAO,Chang-zheng WANG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2018(09)
[3]四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响[J]. 李锐,金玉兰,韩一丁,刘红刚. 临床与实验病理学杂志. 2017(05)
[4]TNFAIP3基因多态性与变应性鼻炎遗传易感性的关联性研究[J]. 杜雅平,韩军,焦晓明,王晓暄. 标记免疫分析与临床. 2016(08)
[5]肿瘤坏死因子诱导蛋白3基因多态性与变应性鼻炎遗传易感性研究[J]. 杨盈琳,沈暘,王小强,柯霞,康厚墉,胡国华,洪苏玲. 重庆医科大学学报. 2015(06)
[6]重组Derp2变应原诱导小鼠变态反应气道炎症动物模型的建立[J]. 李国平,刘志刚,钟南山. 中华微生物学和免疫学杂志. 2005(07)
[7]DNA vaccine encoding Der p 2 allergen generates immunologic protection in recombinant Der p 2 allergen-induced allergic airway inflammation mice model[J]. LI Guo-ping, LIU Zhi-gang, QIU Jing, RAN Pi-xin and ZHONG Nan-shanCollege of Life Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China Guangzhou Institute of Respiratory Disease, Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120,China. Chinese Medical Journal. 2005(07)
[8]高分子基因传递载体研究进展[J]. 黄世文,卓仁禧. 科学通报. 2003(05)
[9]鼻超敏反应实验模型的建立[J]. 赵秀杰,董震,杨占泉,赵德荣. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 1993 (01)
本文编号：3421792
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：79 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pVAX1-Derp2-A20（pDA）的部分测序图
重组质粒 pVAX1-Der p2-A20（pDA）的部分测encing map of recombinant plasmid pVAX1-Der p2-征封的纳米粒溶液外观呈乳白色，均质，半干燥后，为白色粉末，可溶于水，表明成功 SEM 下呈椭圆形、光滑的颗粒，外形完为（292±2.34）nm，结果见图 2。
遵义医科大学硕士学位论文 胡文会3.2.3 PpmDA 的体外表达体外细胞转染实验结果如图 3 所示，PpmDA转染组和 pmDA 转染组均能在激光共聚焦显微镜下检测到荧光。然而，空白 PLGA 组和 NC 组中未检测到荧光，表明质粒 pDA 在经 PLGA 包封后可以在细胞内表达，并保持其生物活性。
【参考文献】：
期刊论文
[1]锌指蛋白A20在气道过敏性疾病中的作用[J]. 胡文会,刘志强,胡田勇,马莉,张华,陈丹,邱书奇. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2018(20)
[2]调节性T细胞与哮喘（英文）[J]. Sheng-tao ZHAO,Chang-zheng WANG. Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2018(09)
[3]四种脱钙液对骨组织HE和免疫组化染色的影响[J]. 李锐,金玉兰,韩一丁,刘红刚. 临床与实验病理学杂志. 2017(05)
[4]TNFAIP3基因多态性与变应性鼻炎遗传易感性的关联性研究[J]. 杜雅平,韩军,焦晓明,王晓暄. 标记免疫分析与临床. 2016(08)
[5]肿瘤坏死因子诱导蛋白3基因多态性与变应性鼻炎遗传易感性研究[J]. 杨盈琳,沈暘,王小强,柯霞,康厚墉,胡国华,洪苏玲. 重庆医科大学学报. 2015(06)
[6]重组Derp2变应原诱导小鼠变态反应气道炎症动物模型的建立[J]. 李国平,刘志刚,钟南山. 中华微生物学和免疫学杂志. 2005(07)
[7]DNA vaccine encoding Der p 2 allergen generates immunologic protection in recombinant Der p 2 allergen-induced allergic airway inflammation mice model[J]. LI Guo-ping, LIU Zhi-gang, QIU Jing, RAN Pi-xin and ZHONG Nan-shanCollege of Life Sciences, Shenzhen University, Shenzhen 518060, China Guangzhou Institute of Respiratory Disease, Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120,China. Chinese Medical Journal. 2005(07)
[8]高分子基因传递载体研究进展[J]. 黄世文,卓仁禧. 科学通报. 2003(05)
[9]鼻超敏反应实验模型的建立[J]. 赵秀杰,董震,杨占泉,赵德荣. 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 1993 (01)
本文编号：3421792
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