雷帕霉素诱导鼻咽癌CNE-1细胞自噬及其机制研究

发布时间：2021-10-20 15:34

　　目的探讨雷帕霉素在诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生自噬过程中的作用及在此过程中FIP200基因的表达变化情况。方法应用CCK-8法检测不同浓度雷帕霉素处理CNE-1细胞4、12、24、48小时后对细胞增殖能力的影响;在激光共聚焦显微镜下观察自噬小体形成过程中LC3颗粒的聚集情况;qRT-PCR及Western blot检测雷帕霉素处理CNE-1细胞48小时后对LC3、p62及FIP200基因的表达水平的影响。结果 CNE-1细胞经不同浓度雷帕霉素处理4小时,各组细胞的增殖能力无明显差异（P>0.05）,在处理12小时后,雷帕霉素对CNE-1细胞增殖活性产生抑制作用,且呈浓度依赖性（P<0.01）;在激光共聚焦显微镜下可见细胞经雷帕霉素处理48小时后出现较明显的LC3颗粒聚集;CNE-1细胞中的自噬相关基因LC3、p62,在雷帕霉素处理48小时后,与对照组相比前者表达升高（P<0.01）,后者表达量降低（P<0.01）,FIP200基因表达水平升高（P<0.01）。结论雷帕霉素能抑制鼻咽癌CNE-1细胞的增殖活性,诱导细胞发生自噬,FIP200可能在调控鼻咽癌... 

【文章来源】：中国耳鼻咽喉头颈外科. 2020,27(10)CSCD

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

不同浓度雷帕霉素在不同时间点对CNE-1细胞增殖的影响

CNE-1细胞经雷帕霉素处理不同时间后,由LC3-Ⅱ、p62、FIP200基因及内参照基因U6的扩增曲线及熔解曲线,LC3-Ⅱ、p62、FIP200及U6的PCR扩增效率恒定,且均已到达平台期,相应的阈值循环数(cycle threshold,Ct)稳定,重现性好;熔解曲线均为单峰特异,引物的特异性好且无引物二聚体产生。说明可以使用该体系对目的基因LC3-Ⅱ、p62、FIP200进行定量分析(图4A～图4H)。qRT-PCR检测结果显示,14 μmol/L的雷帕霉素处理CNE-1细胞12、24、48小时后,LC3-Ⅱ mRNA及FIP200 mRNA表达水平随着雷帕霉素作用时间的延长逐渐升高,而p62 mRNA的表达水平逐渐降低,与对照组比较差异均有统计学意义(F=389.06、76.86、373.80,P<0.01)(图4I～图4K)。图3 雷帕霉素处理不同时间后，A LC3、p62、FIP200及tubulin的Western blot检测；B、C、D LC3-Ⅱ、p62、FIP200蛋白相对表达量，*与对照组（0 h）比较，P<0.05

图2 雷帕霉素诱导LC3阳性光点表达变化情况。与对照组相比，雷帕霉素组的LC3红色荧光增强且出现了聚集现象，雷帕霉素能增强LC3的表达图4 LC3-Ⅱ、p62、FIP200和U6mRNA的qRT-PCR检测。


本文编号：3447160