IL-36α在真菌性角膜炎中的表达及作用
发布时间：2021-10-31 20:16
目的:研究白细胞介素-36α（Interleukin 36 alpha,IL-36α）在真菌性角膜炎（fungal keratitis,FK）中的表达及其作用。方法:1、刮取真菌性角膜炎患者角膜上皮、角膜移植术后剩余的健康供体周边角膜上皮,分别提取mRNA,实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-36αmRNA表达。HE染色（Hematoxylin-Eosin Staining）观察真菌性角膜炎患者角膜组织病理变化,并采用免疫组织化学染色法（Immunohistochemistry,IHC）检测人角膜组织中IL-36α蛋白表达。烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus,AF）感染C57BL/6小鼠角膜建立真菌性角膜炎动物模型,观察感染1、3、5天小鼠角膜炎症情况并记录临床评分,分别采用RT-PCR或蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测真菌感染组小鼠角膜和损伤对照组小鼠角膜中IL-36αm RNA或蛋白表达,进一步采用免疫荧光染色（I mmunofluorescence,IF）明确损伤对照组和感染3天小鼠角膜中IL-36α表达及定位。2、外源性IL-36α重...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IL-36α在真菌性角膜炎中的表达正常人角膜上皮及真菌感染的人角膜上皮中IL-36αmRNA的表达（A）；正常人角膜组织和真菌感的人染角膜组织HE染色（B-C）（200×）；正常人角膜组织及真菌性角膜炎患者角膜组织中IL-36α蛋白免疫组化染色图像（D-E）（200×），蓝色：核染，褐色：IL-36α
∈蠼悄と彼鹎?延?希ㄍ?A）；与IgG+真菌刺激组（IgG+AF组）相比，rmIL-36α预处理后真菌刺激组（rmIL-36α+AF组）小鼠角膜角膜上皮溃疡面积及深度、混浊程度均明显加重，角巩膜缘处可见大量新生血管（图2B-C），临床炎症评分升高（9.0±0.6，p<0.001），差异具有统计学意义（图2D）。给予IgG或IL-36α重组蛋白进行预处理后，检测烟曲霉菌感染的小鼠角膜组织中中性粒细胞及巨噬细胞浸润情况。MPO检测结果显示，rmIL-36α+AF组小鼠角膜中MPO水平较IgG+AF组显著升高（2.49±0.42倍，p<0.001），差异具有统计学意义（图2E）。图2.IL-36α对烟曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎症程度的影响IgG+损伤对照组、IgG+AF组、rmIL-36α+AF组小鼠感染后3天的角膜前节照片（A-C）。IgG+AF组、rmIL-36α+AF组临床炎症评分（D）、角膜组织MPO水平（E）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）3.IL-36α对小鼠烟曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影响IgG或IL-36α重组蛋白预处理小鼠角膜后建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎感染模型，在感染后3天检测角膜组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达变化。结果显示，IgG+AF组角膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平较IgG+损伤对照组显著升高（分别升高49.43±15.32倍，p<0.001；19.46±4.24倍，p<0.001；6.94±1.79倍，p<0.001），rmIL-36α+AF组小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达较IgG+AF组明显增加（分别升高2.22±1.04倍，p<0.001；1.47±0.41倍，p<0.01；3.36±1.18倍，p<0.001），差异均有统计学意义（图3A-C）。同时，IgG+AF组中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平较IgG+损伤对照组明显升高（分别升高1.97±0.06倍，p<0.001；1.51±0.02倍，p<0.001；1.30±0.05倍，p<0.001），
青岛大学硕士学位论文15rmIL-36α+AF组感染的小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达明显高于IgG+AF组（分别升高1.14±0.03倍，p<0.01；1.36±0.04倍，p<0.001；1.49±0.10倍，p<0.01），差异有统计学意义（图3D-G）。图3.IL-36α对小鼠烟曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影响IgG+损伤对照组、IgG+AF组、rmIL-36α+AF组小鼠感染后3天角膜中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA（A-C）、蛋白表达（D）及灰度统计（E-G）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）4.IL-36α在小鼠RAW264.7巨噬细胞中表达及作用
【参考文献】：
期刊论文
[1]Corneal infection in Shandong peninsula of China: a10-year retrospective study on 578 cases[J]. Xiao-Jing Pan,Tao Jiang,Hai Zhu,Peng-Peng Liu,Zhan-Yu Zhou,Alexander J.Mao. International Journal of Ophthalmology. 2016(01)
本文编号：3468784
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
IL-36α在真菌性角膜炎中的表达正常人角膜上皮及真菌感染的人角膜上皮中IL-36αmRNA的表达（A）；正常人角膜组织和真菌感的人染角膜组织HE染色（B-C）（200×）；正常人角膜组织及真菌性角膜炎患者角膜组织中IL-36α蛋白免疫组化染色图像（D-E）（200×），蓝色：核染，褐色：IL-36α
∈蠼悄と彼鹎?延?希ㄍ?A）；与IgG+真菌刺激组（IgG+AF组）相比，rmIL-36α预处理后真菌刺激组（rmIL-36α+AF组）小鼠角膜角膜上皮溃疡面积及深度、混浊程度均明显加重，角巩膜缘处可见大量新生血管（图2B-C），临床炎症评分升高（9.0±0.6，p<0.001），差异具有统计学意义（图2D）。给予IgG或IL-36α重组蛋白进行预处理后，检测烟曲霉菌感染的小鼠角膜组织中中性粒细胞及巨噬细胞浸润情况。MPO检测结果显示，rmIL-36α+AF组小鼠角膜中MPO水平较IgG+AF组显著升高（2.49±0.42倍，p<0.001），差异具有统计学意义（图2E）。图2.IL-36α对烟曲霉菌感染的C57BL/6小鼠角膜炎症程度的影响IgG+损伤对照组、IgG+AF组、rmIL-36α+AF组小鼠感染后3天的角膜前节照片（A-C）。IgG+AF组、rmIL-36α+AF组临床炎症评分（D）、角膜组织MPO水平（E）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）3.IL-36α对小鼠烟曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影响IgG或IL-36α重组蛋白预处理小鼠角膜后建立小鼠烟曲霉菌性角膜炎感染模型，在感染后3天检测角膜组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达变化。结果显示，IgG+AF组角膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA水平较IgG+损伤对照组显著升高（分别升高49.43±15.32倍，p<0.001；19.46±4.24倍，p<0.001；6.94±1.79倍，p<0.001），rmIL-36α+AF组小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达较IgG+AF组明显增加（分别升高2.22±1.04倍，p<0.001；1.47±0.41倍，p<0.01；3.36±1.18倍，p<0.001），差异均有统计学意义（图3A-C）。同时，IgG+AF组中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白水平较IgG+损伤对照组明显升高（分别升高1.97±0.06倍，p<0.001；1.51±0.02倍，p<0.001；1.30±0.05倍，p<0.001），
青岛大学硕士学位论文15rmIL-36α+AF组感染的小鼠角膜中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达明显高于IgG+AF组（分别升高1.14±0.03倍，p<0.01；1.36±0.04倍，p<0.001；1.49±0.10倍，p<0.01），差异有统计学意义（图3D-G）。图3.IL-36α对小鼠烟曲霉菌性角膜炎中促炎因子生成的影响IgG+损伤对照组、IgG+AF组、rmIL-36α+AF组小鼠感染后3天角膜中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA（A-C）、蛋白表达（D）及灰度统计（E-G）。（*:p<0.05,**:p<0.01,***:p<0.001）4.IL-36α在小鼠RAW264.7巨噬细胞中表达及作用
【参考文献】：
期刊论文
[1]Corneal infection in Shandong peninsula of China: a10-year retrospective study on 578 cases[J]. Xiao-Jing Pan,Tao Jiang,Hai Zhu,Peng-Peng Liu,Zhan-Yu Zhou,Alexander J.Mao. International Journal of Ophthalmology. 2016(01)
本文编号：3468784
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