泛素E3连接酶Nedd4L介导Pendrin降解的作用机制研究

发布时间：2021-11-12 14:38

　　目的探讨泛素E3连接酶Nedd4L在Pendrin泛素化修饰中的作用及对Pendrin表达的影响。方法培养293T细胞,Co-IP实验验证Nedd4L与Pendrin存在体内结合;构建Nedd4L真核细胞表达载体;转染293T细胞后Western Blot检测Pendrin的表达量以及泛素化程度。结果 Co-IP实验证实Nedd4L与Pendrin在293T细胞中存在体内结合;真核表达载体构建,能够表达完整Nedd4L蛋白;转染72h后,Pendrin在293T细胞中的表达量降低,泛素化修饰增加,在细胞膜表面表达降低。结论 Nedd4L能够结合Pendrin并通过促进其泛素化修饰以及降低细胞膜表面表达量。其机制可能是通过促进Pendrin泛素化修饰诱导Pendrin内化并进入泛素蛋白酶体途径降解。 

【文章来源】：中华耳科学杂志. 2020,18(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

a转染48、72、96h后Pendrin在293T细胞中表达降低b转染72h后Pendrin在293T膜蛋白中表达降低。

利用免疫磁珠法及Western印记杂交，检测到Nedd4L与Pendrin存在体内结合（图1a和1b），同样的方法，我们检测到Pendrin可以与泛素结合（图1c和1d），这两个结果表明，Pendrin可能是泛素E3连接酶Nedd4L的底物并在其作用下发生泛素化修饰。2.2 过表达Nedd4L能够促进Pendrin泛素化修饰

为了探究Nedd4L与Pendrin在体内的相互作用，我们用构建的真核表达载体转染293T细胞，72h后收集总蛋白，膜蛋白以及浆蛋白，Western印记杂交检测，发现，在293T细胞中过表达Nedd4L能够导致Pendrin表达下降，（t=2.571,P=0.0422,P=0.0143,P=0.0073）（图3a），膜蛋白下降较浆蛋白显著，（t=2.306,P=0.0129）（图3b），这表示Nedd4L很可能在结合Pendrin后促使其发生泛素化修饰并通过泛素蛋白酶体途径或者溶酶体途径发生降解。图3 a转染48、72、96h后Pendrin在293T细胞中表达降低b转染72h后Pendrin在293T膜蛋白中表达降低。


本文编号：3491114