miR-362-3p在喉癌中表达和影响喉癌细胞迁移作用机制的初步研究

发布时间：2021-11-20 15:06

　　前言:喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,占全世界癌症相关死亡的1%。其中,鳞状细胞癌约占喉癌病例的90%,中晚期阶段常伴有局部浸润和远处淋巴结的转移,是喉癌患者主要死因之一。虽然治疗手段不断进步,但是喉癌患者五年生存率仍不乐观,因此,深入研究喉癌转移的分子机制,寻找新的分子靶点对于喉癌的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。前期,通过电子杂交等技术我们发现并克隆了MYCT1基因。研究表明,MYCT1抑制肿瘤细胞增殖、克隆形成和迁移并促进肿瘤细胞凋亡,在喉癌等肿瘤发生发展中发挥重要抑癌基因作用。此外,经二代测序我们在过表达MYCT1喉癌细胞中发现miR-362-3p等基因表达水平存在显著差异,提示miR-362-3p是MYCT1的下游调控基因。miR-362参与妊娠糖尿病、表皮细胞衰老、动脉粥样硬化及肿瘤等人类多种疾病的发生发展。研究表明,miR-362-3p在肾细胞癌和胃癌细胞的迁移中发挥重要作用。然而,miR-362-3p在喉癌中的作用和分子机制相关研究未见报道。通过TargetScan和Starbase等软件预测,我们发现醛缩酶A（ALDOA）是miR-362-3p的潜在靶基因之一。研... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：48 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

miR-362-3p在喉癌中的表达水平检测结果

miR-362-3p inhibitor 转染组迁移细胞数较对照组 nc 显著减少（图2D、2E，P<0.05），提示 miR-362-3p 促进喉癌 Hep2 细胞迁移。图 2，miR-362-3p 对喉癌 Hep2 细胞迁移的影响A：qRT-PCR 检测 miR-362-3p 转染效率。B：细胞划痕愈合实验检测 miR-362-3p 对喉癌 Hep2 细胞迁移的影响。C：细胞划痕愈合实验迁移距离统计分析结果。D：Transwell 小室法检测 miR-362-3p 对喉癌 Hep2 细胞迁移的影响。E：Transwell 小室法迁移细胞数统计分析结果。mi：转染 miR-362-3p 模拟物组；in：转染 miR-362-3p 抑制物组；nc：转染 miR-362-3p 阴性对照物组；con：只加转染试剂组；empty：不做任何处理组。*P<0.053.4 miR-362-3p 靶基因的预测和鉴定经 Targetscan、Starbase 软件预测发现 ALDOA 的 3' UTR 区域与 miR-362-3p

中国医科大学硕士学位论文存在结合位点（图 3A）。并且，ALDOA mRNA 水平在喉癌 Hep2 细胞，咽鳞癌细胞 FADU 细胞以及喉癌细胞 TU212 中均显著低于 HEK293 细胞（图 3B，P<0.05）。我们应用 qRT-PCR 和 Westernblot 验证了 miR-362-3p 对 ALDOAmRNA和蛋白水平的影响。qRT-PCR 结果显示 miR-362-3p mimic 转染组中 ALDOAmRNA 水平较对照组 nc 显著降低，miR-362-3pinhibitor 转染组中 ALDOAmRNA水平较对照组 nc 显著增加（图 3C，P<0.05）。Westernblot 结果显示 miR-362-3pmimic 转染组中 ALDOA 蛋白水平较对照组 nc 显著下调，miR-362-3pinhibitor 转染组中 ALDOA 蛋白水平较对照组 nc 显著上调（图 3D、3E，P<0.05）。这些结果提示 ALDOA 可能是 miR-362-3p 的靶基因。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3507580