调控HSP47的表达对巩膜成纤维细胞胶原代谢的影响
发布时间：2021-12-23 16:20
目的:通过调控热休克蛋白47（heat shock protein 47,HSP47）的基因表达,探索HSP47对巩膜成纤维细胞（scleral fibroblasts,SF）的胶原合成、分泌和降解的影响。方法:正常的4周龄豚鼠,取后极部巩膜组织培养SF并传至3-5代进行实验。分为4组:正常细胞作为正常对照组;空载体转染细胞作为阴性对照（negative control,NC）组;分子克隆构建携带HSP47基因的真核载体转染到巩膜成纤维细胞中作为HSP47上调组;化学法合成HSP47siRNA转染细胞并筛选出最佳抑制效果的序列及浓度作为HSP47下调组。实时定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（western blot,WB）检测各组细胞的HSP47、I型胶原、III型胶原、V型胶原及α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）的信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）和蛋白表达。酶联免疫吸附试验（...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1分子克隆HSP47A.基因装置载体结果B.酶切鉴定：LaneM:DNAMarker，Lane1:PlasmiddigestedbyHindIIIandNheI，Lane
图 2 RNA 电泳 Lane 1、2、3 分别为 NC 25 nM、50 nM、100 nM，Lane4、5、6 分别为第 1 条 HSP47siRNA（5’-ACAGGCCTCTACAACTACT -3’）25 nM、50 nM、100 nM，Lane7、8、9 分别为第 2 条 HSP47siRNA（5’-GACAAAGGAGCAGCTGAAA-3’）25 nM、 50 nM、100 nM，Lane10、11、12 分别为第 3 条 HSP47siRNA（5’-AGCTGTTCTATGCTGACCA-3’） 25nM、 50 nM、100 nM。T-PCR 检测 HSP47、I 型、III 型、V 型胶原和α-SMA 的 mRP47 mRNA 的相对表达量（见表 1），与正常对照组相比，阴性对照=0.913），HSP47 上调组增多 2213.7%（P=0.013），HSP47 下调组减少3）；与阴性对照组相比，HSP47 上调组增多 2022.0%（P=0.012），明显变化（P=0.088）。 型胶原 mRNA 的相对表达量（见表 1），与正常对照组相比，阴性对
医科大学硕士学位论文 郭庆P47 下调组无明显变化（P=0.646，0.669），HSP47 上调组增多 81.0%（P=0,0阴性对照组相比，HSP47 上调组和下调组均无明显变化（P=0.229，P=0.165）表 1 qRT-PCR 检测 mRNA 的相对表达量（ ±s）分组 HSP47 I 型胶原 III 型胶原 V 型胶原 α正常对照 1.00±0.06 1.00±0.15 1.00±0.07 1.00±0.13 1.0阴性对照 1.08±0.25 1.05±0.17 1.01±0.18 1.03±0.17 1.3SP47 上调 23.02±2.74▲◆1.59±0.18▲◆1.35±0.17 1.15±0.15 1.8SP47 下调 0.36±0.02▲0.62±0.19 0.65±0.05▲◆0.43±0.09▲◆0.7▲与正常对照组比较 P＜0.05，◆与阴性对照组比较 P＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]树鼩形觉剥夺性近视模型的建立及观察[J]. 杨冬梅,朱勤,李娜,郭立云,张晓帆,张洁莹,胡敏,代解杰. 实验动物与比较医学. 2017 (03)
[2]转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究[J]. 张兰兰,刘琼,于健,唐晓娟,徐静. 眼科新进展. 2016(11)
[3]MMP-2与TIMP-2在豚鼠形觉剥夺性近视眼脉络膜表达的变化及调控机制[J]. 吴振凯,刘双珍,夏晓波,毛俊峰,许惠卓. 中国老年学杂志. 2015(19)
[4]豚鼠形觉剥夺超高度近视模型的形态学研究[J]. 丁雯芝,张婷,贾丽丽,杨建国,邹俊. 临床眼科杂志. 2014(04)
[5]TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达[J]. 牟丽丽,刘桂香,王玲,韩明磊,高岩. 眼科新进展. 2011(11)
[6]豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达[J]. 刘桂香,王玲,彭鑫,杨蓓,高岩. 中国眼耳鼻喉科杂志. 2010(02)
[7]透镜诱导豚鼠近视眼巩膜基质中基质金属蛋白酶2及其组织抑制剂和生长因子的变化[J]. 胡萍,李镜海. 眼视光学杂志. 2008(01)
[8]豚鼠形觉剥夺性近视眼巩膜基质金属蛋白酶-2表达的实验研究[J]. 贾丁,周翔天,吕帆,周胜杰,陈蔚,瞿佳. 眼视光学杂志. 2006(06)
[9]基质金属蛋白酶-2在实验性近视眼鸡巩膜成纤维细胞的表达[J]. 蒋莉,刘双珍,王剑锋. 眼科新进展. 2005(06)
[10]视网膜、脉络膜在鸡形觉剥夺性近视眼发病机制中的作用[J]. 刘丽,周跃华. 眼科. 2004(05)
本文编号：3548797
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：49 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1分子克隆HSP47A.基因装置载体结果B.酶切鉴定：LaneM:DNAMarker，Lane1:PlasmiddigestedbyHindIIIandNheI，Lane
图 2 RNA 电泳 Lane 1、2、3 分别为 NC 25 nM、50 nM、100 nM，Lane4、5、6 分别为第 1 条 HSP47siRNA（5’-ACAGGCCTCTACAACTACT -3’）25 nM、50 nM、100 nM，Lane7、8、9 分别为第 2 条 HSP47siRNA（5’-GACAAAGGAGCAGCTGAAA-3’）25 nM、 50 nM、100 nM，Lane10、11、12 分别为第 3 条 HSP47siRNA（5’-AGCTGTTCTATGCTGACCA-3’） 25nM、 50 nM、100 nM。T-PCR 检测 HSP47、I 型、III 型、V 型胶原和α-SMA 的 mRP47 mRNA 的相对表达量（见表 1），与正常对照组相比，阴性对照=0.913），HSP47 上调组增多 2213.7%（P=0.013），HSP47 下调组减少3）；与阴性对照组相比，HSP47 上调组增多 2022.0%（P=0.012），明显变化（P=0.088）。 型胶原 mRNA 的相对表达量（见表 1），与正常对照组相比，阴性对
医科大学硕士学位论文 郭庆P47 下调组无明显变化（P=0.646，0.669），HSP47 上调组增多 81.0%（P=0,0阴性对照组相比，HSP47 上调组和下调组均无明显变化（P=0.229，P=0.165）表 1 qRT-PCR 检测 mRNA 的相对表达量（ ±s）分组 HSP47 I 型胶原 III 型胶原 V 型胶原 α正常对照 1.00±0.06 1.00±0.15 1.00±0.07 1.00±0.13 1.0阴性对照 1.08±0.25 1.05±0.17 1.01±0.18 1.03±0.17 1.3SP47 上调 23.02±2.74▲◆1.59±0.18▲◆1.35±0.17 1.15±0.15 1.8SP47 下调 0.36±0.02▲0.62±0.19 0.65±0.05▲◆0.43±0.09▲◆0.7▲与正常对照组比较 P＜0.05，◆与阴性对照组比较 P＜0.05。
【参考文献】：
期刊论文
[1]树鼩形觉剥夺性近视模型的建立及观察[J]. 杨冬梅,朱勤,李娜,郭立云,张晓帆,张洁莹,胡敏,代解杰. 实验动物与比较医学. 2017 (03)
[2]转化生长因子-β（TGF-β）影响豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的研究[J]. 张兰兰,刘琼,于健,唐晓娟,徐静. 眼科新进展. 2016(11)
[3]MMP-2与TIMP-2在豚鼠形觉剥夺性近视眼脉络膜表达的变化及调控机制[J]. 吴振凯,刘双珍,夏晓波,毛俊峰,许惠卓. 中国老年学杂志. 2015(19)
[4]豚鼠形觉剥夺超高度近视模型的形态学研究[J]. 丁雯芝,张婷,贾丽丽,杨建国,邹俊. 临床眼科杂志. 2014(04)
[5]TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达[J]. 牟丽丽,刘桂香,王玲,韩明磊,高岩. 眼科新进展. 2011(11)
[6]豚鼠形觉剥夺早期后极部巩膜基质金属蛋白酶2及其抑制剂动态表达[J]. 刘桂香,王玲,彭鑫,杨蓓,高岩. 中国眼耳鼻喉科杂志. 2010(02)
[7]透镜诱导豚鼠近视眼巩膜基质中基质金属蛋白酶2及其组织抑制剂和生长因子的变化[J]. 胡萍,李镜海. 眼视光学杂志. 2008(01)
[8]豚鼠形觉剥夺性近视眼巩膜基质金属蛋白酶-2表达的实验研究[J]. 贾丁,周翔天,吕帆,周胜杰,陈蔚,瞿佳. 眼视光学杂志. 2006(06)
[9]基质金属蛋白酶-2在实验性近视眼鸡巩膜成纤维细胞的表达[J]. 蒋莉,刘双珍,王剑锋. 眼科新进展. 2005(06)
[10]视网膜、脉络膜在鸡形觉剥夺性近视眼发病机制中的作用[J]. 刘丽,周跃华. 眼科. 2004(05)
本文编号：3548797
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