虾青素在烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎中的抗炎作用

发布时间：2022-01-08 00:48

　　目的:真菌性角膜炎是角膜溃疡的主要病因,可导致严重的视力损害和失明。虾青素（Astaxanthin,ASX）是一种脂溶性酮类胡萝卜素,已被证明能抑制多种疾病的免疫炎症反应。本研究旨在探讨ASX对烟曲霉性角膜炎小鼠模型的作用及其具体作用机制。方法:为了探究ASX对于烟曲霉菌诱导的角膜炎的作用,进行了体内及体外实验。体内实验部分,准备8周C57BL/6小鼠,通过腹腔注射8%水合氯醛（0.4ml/kg）麻醉。在立体显微镜下,用角膜基质注射针将烟曲霉菌孢子悬浮液注射于右眼角膜基质中。将小鼠平均随机分为ASX处理组以及DMSO处理组,并用对应试剂溶液滴眼处理（3次/天）,在不同时间点麻醉小鼠后在裂隙灯下拍摄小鼠角膜照片并根据角膜的炎症程度记录临床评分。在不同时间点麻醉小鼠后通过颈椎脱臼法处死小鼠,根据Real-Time RT-PCR法、Western Blot法和ELISA法检测炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β、HMGB1）以及模式识别受体TLR2、TLR4的表达水平,并用免疫荧光法检测角膜中性粒细胞、巨噬细胞及TLR2、TLR4的表达。体外细胞系实验部分,根据处理条件分为6组,分别为正常组... 

【文章来源】：青岛大学山东省

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

ASX减轻烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎小鼠模型的疾病表现;A.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO处理组与ASX处理组裂隙灯下拍摄角膜的临床表现；B.小鼠真菌性角膜炎感染后第1、3、5天DMSO处理

青岛大学硕士学位论文32附录图1ASX减轻烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎小鼠模型的疾病表现;A.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO处理组与ASX处理组裂隙灯下拍摄角膜的临床表现；B.小鼠真菌性角膜炎感染后第1、3、5天DMSO处理组与ASX处理组的炎症评分；C.小鼠真菌性角膜炎感染后第3天DMSO处理组与ASX处理组的MPO活性（ap<0.05；bp<0.01）。图2ASX减少烟曲霉菌性角膜炎小鼠角膜中性粒细胞和巨噬细胞的募集A.中性粒细胞在正常小鼠角膜、感染后第3天以及感染后ASX处理第3天小鼠角膜中的免疫荧光染色图像。中性粒细胞阳性染色为绿色；蓝色为核染

附录355天收集各分组小鼠角膜，通过WB法检测其中TLR2及TLR4的蛋白表达；I.TLR2在正常小鼠角膜、感染3天以及感染后ASX处理3天小鼠角膜中的免疫荧光染色图像。TLR4阳性染色为绿色；蓝色为核染色(DAPI)；J.TLR4在正常小鼠角膜、感染3天以及感染后ASX处理3天小鼠角膜中的免疫荧光染色图像。TLR4阳性染色为绿色；蓝色为核染色(DAPI)。(bp<0.01)。图5ASX抑制RAW264.7细胞实验中炎症因子的产生，并抑制TLR2、TLR4的表达根据处理条件分为6组：正常组、DMSO组、ASX处理组、烟曲霉菌组、烟曲霉菌+DMSO组和烟曲霉菌+ASX组，对应的分组中加入相同浓度的DMSO及ASX预处理2小时后，在对应的分组中加入灭活的烟曲霉菌菌丝悬浮液，A-C.刺激细胞8小时后收细胞，通过Real-TimeRT-PCR法检测细胞中IL-1β、TNF-α、HMGB-1的mRNA表达；D-E.刺激细胞8小时后收细胞，通过Real-TimeRT-PCR法检测细胞中TLR2、TLR4的mRNA表达。(bp<0.01)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Boxb mediate BALB/c mice corneal inflammation through a TLR4/MyD88-dependent signaling pathway in Aspergillus fumigatus keratitis[J]. Min Liu,Cui Li,Gui-Qiu Zhao,Jing Lin,Cheng-Ye Che,Qiang Xu,Qian Wang,Rui Xu,Ya-Wen Niu.  International Journal of Ophthalmology. 2018(04)
[2]Antioxidant dietary approach in treatment of fatty liver: New insights and updates[J]. Alessandra Ferramosca,Mariangela Di Giacomo,Vincenzo Zara.  World Journal of Gastroenterology. 2017(23)



本文编号：3575580