视神经损伤后Jarid1b和H3K4me3的表达及RGCs的原代培养和鉴定
发布时间：2022-01-21 12:21
目的:通过建立大鼠视神经损伤模型,研究视神经损伤后轴突中Jarid1b及H3K4me3的表达变化,以了解Jarid1b是否在视神经损伤中发挥一定的作用;建立视网膜神经节细胞（RGCs）的原代培养模型,观察光镜下的细胞形态,并对其纯度进行免疫细胞化学方法鉴定,为RGCs的生理功能或生物学特性研究提供一定的基础。方法:1.选取清洁级成年SD大鼠15只,雌雄不限,每只大鼠均以左眼作为损伤眼,使用显微血管夹在眼球后方约2mm处垂直视神经钳夹约15s,以损伤视神经;以右眼作为对照眼,暴露视神经15s,不进行损伤。损伤或暴露视神经后对大鼠双眼进行眼部检查和FVEP检测,并与损伤前的FVEP结果进行对照,以确保视神经损伤模型成功。在视神经损伤后第3 d、7 d、14 d,分别随机处死每组中的5只大鼠,取左眼和右眼视神经组织制作病理切片分别作为急性损伤组和正常对照组。对切片进行免疫组化染色后,计算两组Jarid1b和H3K4me3的阳性表达率,进行统计学分析。2.选取出生7d以内的SD大鼠,麻醉后摘除眼球,分离出视网膜组织,用木瓜蛋白酶进行充分消化,制成RGCs悬液,以兔抗大鼠巨噬细胞多克隆抗体、山羊...
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
暴露视神经组织
图 1 暴露视神经组织 图 2 视神经损伤后大鼠瞳孔散大2.2 视神经组织病理切片（1）取材：在视神经损伤后第 3d、7d、14d，分别随机处死 5 只大鼠，切取其左眼及右眼视神经组织各约 6mm。（2）固定：将视神经组织标本置于 10%甲醛溶液内固定 24h。（3）脱水：将标本置于 70%、80%、90%、95%的酒精溶液内各 1h，无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ内各 10min 进行梯度脱水。（4）透明：将标本置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ内各 15min。（5）包埋：将标本置于 55℃融化状态的石蜡中包埋 30min，之后冷却凝固。（6）切片：将蜡块做连续切片，片厚 3μm，40℃水浴。每个标本各做两张切片。用防脱片载玻片捞出切片，置于 64℃烤箱中烘烤 1h。2.3 免疫组化步骤（1）切片脱蜡、水化：将切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ内各 10min，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ内各 5min、5min、5min，95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇内各 5min。用蒸馏水
图 3 正常大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200） 图 4 损伤 3d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200）图 5 损伤 7d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200） 图 6 损伤 14d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200）表 1 同组内各时间点 Jarid1b 表达比较组别 正常对照组 急性损伤组3 天F 1.499F 590.2387 天
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑源性神经因子在慢性疼痛中的研究进展[J]. 刘丽娟,高云,熊伟. 口腔疾病防治. 2019(02)
[2]睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响[J]. 赵忠惠,邹正,毛崇丹,郝广志,杨芳宇,石佐林,艾运政,董玉书. 神经解剖学杂志. 2019(01)
[3]心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用[J]. 李芮琳,刘文杰,袁庆,张彤,徐耀,胡利民,柴丽娟. 天津中医药. 2019(01)
[4]神经营养因子对脑外伤后神经发生及功能障碍治疗进展[J]. 王童,刘阳,朱业淘. 四川精神卫生. 2018(06)
[5]脑源性神经营养因子在神经退行性疾病中的作用研究进展[J]. 王子礼,张欢,张若楠,陈显兵. 湖北民族学院学报(医学版). 2018(04)
[6]高压氧对急性一氧化碳中毒大鼠少突胶质细胞前体细胞ADAM10 mRNA表达的影响[J]. 郭大志,冯园,胡慧军,李娜,潘树义. 中国医药导报. 2018(05)
[7]白细胞介素17A在视神经损伤模型小鼠神经再生中的作用[J]. 李艳芬,叶晓阳,陈晓帆,张伟. 中国组织工程研究. 2018(12)
[8]癌钙调蛋白在炎症反应促视神经再生作用中的研究进展[J]. 马林昆,曹霞,罗生平. 国际眼科杂志. 2017(07)
[9]血府逐瘀汤对外伤性视神经损伤模型大鼠Nogo-A、GAP-43偶联蛋白组表达的影响[J]. 徐照,曾琳,王凤洲,丁伟森. 江苏中医药. 2016(09)
[10]横向定量牵拉法制作大鼠视神经精确损伤模型[J]. 谷新怡,周剑,赵朋波,刘爱伟,尚姗姗,闫晓玲,吴鲁华,夏燕婷. 国际眼科杂志. 2016(09)
博士论文
[1]rhEPO对大鼠不同程度视神经损伤修复的实验研究[D]. 张晓雯.青岛大学 2017
[2]外伤性视神经病变模型建立及干预修复研究[D]. 于金国.天津医科大学 2013
硕士论文
[1]脑卒中后星形胶质细胞的神经保护及神经修复作用及分子机制[D]. 崔鹤鹛.河北医科大学 2017
本文编号：3600250
【文章来源】：青岛大学山东省
【文章页数】：50 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
暴露视神经组织
图 1 暴露视神经组织 图 2 视神经损伤后大鼠瞳孔散大2.2 视神经组织病理切片（1）取材：在视神经损伤后第 3d、7d、14d，分别随机处死 5 只大鼠，切取其左眼及右眼视神经组织各约 6mm。（2）固定：将视神经组织标本置于 10%甲醛溶液内固定 24h。（3）脱水：将标本置于 70%、80%、90%、95%的酒精溶液内各 1h，无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ内各 10min 进行梯度脱水。（4）透明：将标本置于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ内各 15min。（5）包埋：将标本置于 55℃融化状态的石蜡中包埋 30min，之后冷却凝固。（6）切片：将蜡块做连续切片，片厚 3μm，40℃水浴。每个标本各做两张切片。用防脱片载玻片捞出切片，置于 64℃烤箱中烘烤 1h。2.3 免疫组化步骤（1）切片脱蜡、水化：将切片放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ内各 10min，无水乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ内各 5min、5min、5min，95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇、50%乙醇内各 5min。用蒸馏水
图 3 正常大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200） 图 4 损伤 3d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200）图 5 损伤 7d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200） 图 6 损伤 14d 大鼠视神经 Jarid1b 表达（×200）表 1 同组内各时间点 Jarid1b 表达比较组别 正常对照组 急性损伤组3 天F 1.499F 590.2387 天
【参考文献】：
期刊论文
[1]脑源性神经因子在慢性疼痛中的研究进展[J]. 刘丽娟,高云,熊伟. 口腔疾病防治. 2019(02)
[2]睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响[J]. 赵忠惠,邹正,毛崇丹,郝广志,杨芳宇,石佐林,艾运政,董玉书. 神经解剖学杂志. 2019(01)
[3]心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用[J]. 李芮琳,刘文杰,袁庆,张彤,徐耀,胡利民,柴丽娟. 天津中医药. 2019(01)
[4]神经营养因子对脑外伤后神经发生及功能障碍治疗进展[J]. 王童,刘阳,朱业淘. 四川精神卫生. 2018(06)
[5]脑源性神经营养因子在神经退行性疾病中的作用研究进展[J]. 王子礼,张欢,张若楠,陈显兵. 湖北民族学院学报(医学版). 2018(04)
[6]高压氧对急性一氧化碳中毒大鼠少突胶质细胞前体细胞ADAM10 mRNA表达的影响[J]. 郭大志,冯园,胡慧军,李娜,潘树义. 中国医药导报. 2018(05)
[7]白细胞介素17A在视神经损伤模型小鼠神经再生中的作用[J]. 李艳芬,叶晓阳,陈晓帆,张伟. 中国组织工程研究. 2018(12)
[8]癌钙调蛋白在炎症反应促视神经再生作用中的研究进展[J]. 马林昆,曹霞,罗生平. 国际眼科杂志. 2017(07)
[9]血府逐瘀汤对外伤性视神经损伤模型大鼠Nogo-A、GAP-43偶联蛋白组表达的影响[J]. 徐照,曾琳,王凤洲,丁伟森. 江苏中医药. 2016(09)
[10]横向定量牵拉法制作大鼠视神经精确损伤模型[J]. 谷新怡,周剑,赵朋波,刘爱伟,尚姗姗,闫晓玲,吴鲁华,夏燕婷. 国际眼科杂志. 2016(09)
博士论文
[1]rhEPO对大鼠不同程度视神经损伤修复的实验研究[D]. 张晓雯.青岛大学 2017
[2]外伤性视神经病变模型建立及干预修复研究[D]. 于金国.天津医科大学 2013
硕士论文
[1]脑卒中后星形胶质细胞的神经保护及神经修复作用及分子机制[D]. 崔鹤鹛.河北医科大学 2017
本文编号：3600250
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