糖尿病性视网膜病变患者血浆外泌体定量蛋白组学研究

发布时间：2022-04-28 19:38

　　目的:糖尿病性视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是主要的致盲性眼病,其发病机制尚未完全阐明,目前已知DR发生与外泌体相关,因此,我们运用定量蛋白质组学技术,分析增殖性糖尿病性视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）患者血浆外泌体蛋白的表达变化情况,寻找PDR的生物学标记物,探寻PDR发生的机制和潜在治疗靶点。方法:第一部分:分离与鉴定血浆外泌体收集2017年-2018年天津医科大学眼科医院住院的PDR患者、糖尿病未发生眼底改变患者（以下简称为DM）和正常对照的血浆和临床信息,用差速离心法分离血浆来源外泌体,透射电镜观察外泌体的形态与大小,WB验证外泌体表面蛋白:CD9、CD63和CD81。分别测2ml血浆来源的微囊泡（micro vesical,MV）与外泌体的蛋白浓度,考马斯亮蓝染色实验分析外泌体、MV、不含胞外囊泡的血浆和血浆的蛋白分布情况。第二部分:定量蛋白组学分析血浆来源的外泌体分离三组患者血浆外泌体,将同组5个患者的外泌体混合成一份,取出部分做蛋白浓度测定,并使用同位素质量标签i TRAQ试剂标记样本... 

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、分离与鉴定血浆外泌体
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验材料与仪器
        1.1.2 实验对象纳入与排除
        1.1.3 差速离心法分离外泌体
        1.1.4 血浆外泌体鉴定
        1.1.5 血浆不同成分浓度测定
        1.1.6 考马斯亮蓝实验
    1.2 结果
        1.2.1 病人临床信息总结
        1.2.2 外泌体鉴定结果
        1.2.3 外泌体和MV的总蛋白浓测量
        1.2.4 血浆不同成分考马斯亮蓝结果
    1.3 讨论
    1.4 小结
二、血浆外泌体定量蛋白组学研究
    2.1 实验材料和方法
        2.1.1 实验材料与仪器
        2.1.2 血浆外泌体蛋白质谱样品分离与制备
        2.1.3 ELISA验证
        2.1.4 hRMECs氧化应激模型的建立
        2.1.5 hRMECs的 TNFAIP8 表达情况
    2.2 结果
        2.2.1 外泌体蛋白浓度测定结果
        2.2.2 蛋白鉴定结果与差异蛋白筛选
        2.2.3 ELISA验证结果
        2.2.4 hRMECs的 CCK-8 实验结果
        2.2.5 hRMECs的 TNFAIP8 表达情况
    2.3 讨论
    2.4 小结
三、4-羟基壬稀酸刺激人视网膜微血管内皮细胞的定量蛋白组学研究
    3.1 实验材料和方法
        3.1.1 实验材料与仪器
        3.1.2 CCK-8 实验评估4-HNE对 hRMECs增殖的影响
        3.1.3 蛋白组学样本制备
        3.1.4 液相串联质谱分析与数据分析
    3.2 结果
        3.2.1 CCK-8 结果
        3.2.2 定量蛋白组学结果
        3.2.3 差异蛋白的GO分析
        3.2.4 差异蛋白涉及的KEGG分析
        3.2.5 蛋白与蛋白相互作用
    3.3 讨论
    3.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 糖尿病视网膜病变的蛋白组学研究进展
    综述参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent progress in mass spectrometry proteomics for biomedical research[J]. Xu Li,Wenqi Wang,Junjie Chen.  Science China（Life Sciences）. 2017(10)
[2]蛋白质组学研究进展与趋势[J]. 曾嵘,夏其昌.  中国科学院院刊. 2002(03)

博士论文
[1]糖尿病性视网膜病变患者血清差异蛋白质组学研究[D]. 刘银萍.南方医科大学 2012



本文编号：3649400