视网膜色素上皮细胞ZO-1,E-cadherin,和Connexin43蛋白在增生性玻璃体视网膜病变早期变化规律及其内在

发布时间：2022-06-03 20:42

　　目的:成熟的视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial,RPE）细胞生理条件下处于静息状态,细胞与细胞之间规则排列,组成单层上皮组织夹在神经视网膜和脉络膜之间维护神经视网膜功能。其上皮的完整性依靠相邻细胞间、细胞与基底膜间三种类型细胞连接（紧密、锚定和缝隙连接）的相互作用来维持。三种连接中标志性的连接蛋白分别是zona occludens 1（ZO-1）,E-cadherin（E-Ca）和connexin 43（CX 43）。增生性玻璃体视网膜病变（Proliferative vitreoretinopathy,PVR）是视网膜脱离手术失败的主要原因,且自始至终未找到肯定的临床治疗方法成为眼科研究领域的难题。PVR发病机制中一个重要机制是游离的视网膜色素上皮RPE细胞发生了向间充质细胞转换（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）。然而,RPE细胞发生EMT之前首先是细胞失去接触,即细胞间的连接蛋白发生破坏或表达异常,但是PVR微环境下,RPE细胞间连接蛋白的早期变化及其内在的关联和机制尚无深入研究。本研究将调查PVR微环境... 

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
中英文缩略词对照表
第1章 引言
第2章 视网膜色素上皮细胞ZO-1,E-Ca,和CX43 蛋白在增生性玻璃体视网膜病变早期变化规律及其内在联动关系及机制
    2.1 实验材料、试剂和仪器
        2.1.1 主要试剂和抗体
        2.1.2 实验动物
        2.1.3 主要仪器和耗材
        2.1.4 引物
        2.1.5 SiRNAs
        2.1.6 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 人原代视网膜色素上皮(phRPE)细胞的提取:
        2.2.2 细胞培养与处理
        2.2.3 SiRNA与质粒的转染
        2.2.4 实时定量 PCR(qRT-PCR)
        2.2.5 蛋白质印迹分析(western blot,WB)
        2.2.6 透射电子显微镜(transmission electron microscopy, TEM)
        2.2.7 RBCC 免疫荧光分析(immunofluorescence analysis,IF):
        2.2.8 免疫共沉淀(coimmunoprecipitation assay,co-IP)
        2.2.9 荧光黄染料迁移实验(Lucifer yellow dye transfer assay)
        2.2.10 渗透率测定(Permeability assays)
        2.2.11 统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 TGF-β1降低了phRPE细胞中E-cadherin,connexin 43和ZO-1的表达,其中E-cadherin最早受到影响。
        2.3.2 敲低E-cadherin导致connexin43和ZO-1 的表达减少。
        2.3.3 敲低connexin 43导致E-cadherin和ZO-1表达降低
        2.3.4 ZO-1的敲低导致E-cadherin和connexin43 的表达减少
        2.3.5 小鼠RPE单层细胞连接的超微结构
        2.3.6 E-cadherin,connexin43和ZO-1共定位且彼此存在相互作用
        2.3.7 敲低ARPE-19 细胞中的E-cadherin,connexin43或ZO-1 后将抑制荧光黄通过缝隙连接的转移
        2.3.8 敲低ARPE-19 细胞中的E-cadherin,connexin43或ZO-1 会增加上皮渗透性
    2.4 讨论
    2.5 小结
第3章 结论与展望
    3.1 结论
    3.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3653454