硫醇转移酶基因敲除小鼠模型的建立及其白内障形成机制

发布时间：2022-10-20 15:09

　　目的:通过建立硫醇转移酶（TTase）基因敲除小鼠模型,观察其晶状体形态和生化方面随年龄的改变,探讨TTase在晶状体氧化还原系统中的重要作用及参与年龄相关性白内障形成的机制。方法:建立TTase基因敲除小鼠模型并进行基因型鉴定。裂隙灯观察TTase基因敲除型和野生型小鼠白内障随年龄的发生情况。检测小鼠晶状体中谷胱甘肽（GSH）含量。Western blot检测晶状体中氧化产物蛋白质二硫化物（PSSG）的变化。免疫共沉淀法鉴定形成PSSG的蛋白质。观察纯化的重组人晶状体TTase（RHLT）对PSSG的脱硫醇作用。结果:TTase基因敲除型小鼠和野生型小鼠白内障的发生均随年龄而增加,且主要表现为核性白内障。在TTase基因敲除型小鼠中,白内障最早从4月龄开始发生,9月龄时最为显著;野生型小鼠白内障最早从9月龄开始发生,12月龄时最为显著。两种基因型小鼠晶状体中GSH含量均随年龄增加而下降,9月龄TTase基因敲除型小鼠晶状体中GSH下降更为显著,且PSSG的表达明显高于野生型,主要表现为高分子聚合物。免疫共沉淀反应证实形成PSSG的蛋白质包含肌动蛋白（actin）和三磷酸甘油醛脱氢酶（... 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
0引言
1材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1建立TTase基因敲除小鼠模型
        1.2.2小鼠基因型鉴定
        1.2.3裂隙灯观察小鼠晶状体混浊情况
        1.2.4小鼠晶状体可溶性蛋白质的提取与定量
        1.2.5小鼠晶状体GSH含量的测定
        1.2.6 Western blot检测小鼠晶状体PSSG蛋白质的表达
        1.2.7免疫共沉淀法检测形成PSSG的蛋白质
        1.2.8重组人晶状体TTase的分离纯化及脱硫醇作用检测
2结果
    2.1小鼠基因型鉴定及生长情况
    2.2不同基因型小鼠白内障发生情况
    2.3不同基因型小鼠晶状体GSH含量变化
    2.4不同基因型小鼠晶状体PSSG蛋白质的表达
    2.5免疫共沉淀法鉴定形成PSSG的蛋白质
    2.6重组人晶状体TTase的脱硫醇作用
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]硫醇转移酶（TTase）对紫外线诱导氧化损伤的人晶状体上皮细胞的保护作用[J]. 郑晓亮,张婕,严宏.  眼科新进展. 2017(07)



本文编号：3694767