沉默GFAP基因调控高糖诱导的视网膜微血管内皮细胞增殖与凋亡

发布时间：2023-01-09 14:44

　　目的:研究沉默胶质纤维酸性蛋白（GFAP）基因对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMECs）增殖和凋亡的影响及其机制。方法:采用qRT-PCR法检测高糖（30mmol/mL）和低糖（5mmol/mL）处理的hRMECs中GFAP的表达。通过慢病毒介导法建立GFAP基因稳定沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型,用SRI-011381（TGF-β信号通路特异性激活剂）、二甲基亚砜（DMSO）处理该细胞模型,采用Western blot法检测细胞中GFAP、转化生长因子-β1（TGF-β1）、转录激活因子2（Smad2）、Smad3蛋白的表达,并分别采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。结果:高糖处理的hRMECs中GFAP表达水平显著升高。通过慢病毒介导法可成功构建GFAP基因沉默的高糖诱导的hRMECs细胞模型,且沉默GFAP后,细胞的增殖能力明显提高,凋亡率明显抑制,TGF-β信号通路关键基因TGF-β1、Smad2、Smad3的蛋白表达均明显抑制,而激活TGF-β信号通路可逆转沉默GFAP对高糖诱导的hRMECs细胞的增殖促进和凋亡抑制作用。结论:沉默GFAP基因可促进... 

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
0引言
1材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1细胞培养
        1.2.2细胞处理与分组
        1.2.3 qRT-PCR法检测细胞中GFAP mRNA的表达
        1.2.4 Western blot检测细胞中相关蛋白的表达
        1.2.5 CCK-8法检测细胞增殖能力
        1.2.6 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
2结果
    2.1 GFAP在高糖诱导的hRMECs中的表达
    2.2沉默GFAP的高糖诱导的细胞模型建立
    2.3沉默GFAP对高糖诱导的hRMECs增殖和凋亡的影响
    2.4沉默GFAP对高糖诱导的hRMECs中TGF-β信号通路的影响
    2.5激活TGF-β信号通路逆转沉默GFAP对高糖诱导的细胞增殖和凋亡的调控作用
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]早期糖尿病视网膜病变中eEF2K活性变化的实验观察[J]. 廖怿,何卉,张兆强,孟菊峰,叶立军,张越华.  临床眼科杂志. 2019(01)
[2]老年脑恶性胶质瘤患者血清TGF-β和GFAP的表达及与临床预后的关系[J]. 张极星,张淑荣,赵亮,黄丽娟,王占强,高凤全.  中国老年学杂志. 2018(20)
[3]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li.  Bone Research. 2016(01)



本文编号：3729367