时钟基因Bmal1对鼻咽癌移植瘤放疗敏感性的影响

发布时间：2023-02-12 19:17

　　目的:探讨双向调控时钟基因Bmal1(brain and muscle arnt-like1)对鼻咽癌CNE1裸鼠移植瘤生长的影响及与放疗敏感性的关系。方法:采用慢病毒感染方法,构建Bmal1基因CNE1OE(过表达组)、CNE1OENC(过表达对照组)、CNE1sh3(低表达组)、CNE1shNC(低表达对照组)4株细胞,Western blot验证各组细胞Bmal1蛋白表达情况;4株细胞分别皮下注射相应的4组裸鼠,移植瘤生长后测量其体积;给予6-MeV电子线15 Gy照射裸鼠移植瘤,观察放疗后各组移植瘤体积变化情况。剥离移植瘤,RTPCR及Western blot分别检测Bmal1、P53、P21 mRNA及蛋白表达情况。结果:Western blot结果提示,与各自对照组对比,CNE1OE组Bmal1蛋白过表达,CNE1sh3组Bmal1蛋白低表达,表明细胞转染成功。成功构建裸鼠移植瘤模型,CNE1OE组裸鼠移植瘤体积明显小于CNE1OENC组,CNE1sh3组体积明显大于CNE1shNC组(P<0.05)。放疗后,CNE1OE、CNE1OENC、CNE1shNC组裸鼠移植...

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞系
        1.1.2 主要试剂
        1.1.3 实验动物
    1.2 方法
        1.2.1 Bmal1基因过表达慢病毒载体的构建
        1.2.2基因慢病毒干扰载体的构建
        1.2.3 慢病毒的包装和病毒滴度的测定
        1.2.4 慢病毒感染目的细胞
        1.2.5 Western blot验证稳转CNE1细胞中Bmal1蛋白的表达
        1.2.6 裸鼠饲养及接种
        1.2.7肿瘤体积测量与计算
        1.2.8 裸鼠移植瘤放疗
        1.2.9 RT-PCR检测裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21 m RNA表达水平
        1.2.1 0 Western blot检测裸鼠移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白表达
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 Western blot验证CNE1细胞Bmal1基因过表达及干扰效果
    2.2 构建移植瘤模型后肿瘤生长情况
    2.3 放疗后裸鼠移植瘤生长情况
    2.4 RT-PCR检测Bmal1、P53、P21 m RNA的相对表达
    2.5 Western blot检测移植瘤Bmal1、P53、P21蛋白的相对表达
3 讨论



本文编号：3741673