成熟角膜上皮细胞向干细胞逆分化的初步研究

发布时间：2023-03-13 21:11

　　目的:检测人成熟角膜上皮细胞在体外向干细胞逆向分化的可行性及关键因素。方法:选取同济医院眼库中捐献者的正常角膜,人体组织的使用符合赫尔辛基宣言并经同济医院伦理委员会批准。用Dispase Ⅱ酶消化得到成熟角膜上皮(MCEC);应用石蜡包埋切片或0.25%trypsin/1 m M EDTA(T/E)消化-甩片以及免疫荧光染色法,检测CK12和p63α在MCEC中的表达情况,以角膜缘上皮做对照。采用胶原酶A消化法自角膜缘体外分离、培养角膜缘微环境细胞(LNC)。实验组(3D-MCEC+LNC组)将传代培养的第4-6代LNC与MCEC按1:4混合,在50%基质胶(Matrigel)构建的三维(3D)环境下共培养;对照组(3D-MCEC组)将MCEC单独3D培养。培养10天后,用细胞甩片、免疫荧光染色双标法,检测CK12、p63α、PCK、Vimentin的表达情况。表达强度采用Image J、Graphpad Prism 7.0软件进行图像分析、数据处理,细胞均数以(?)表示,采用Student’s t-检验比较组间差异,P<0.05具有统计学意义。结果:在石蜡切片免疫荧光染色中,M...

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