miR-155对小鼠ILC2分泌Th2型细胞因子的影响

发布时间：2023-04-02 01:17

　　目的:体外分选小鼠脾脏ILC2细胞,探讨miR-155对ILC2分泌Th2型炎症因子的影响及其机制。方法:1、将6-8周BALB/c野生型雌性小鼠断颈处死后,无菌操作台内取出体内脾脏,再加入淋巴细胞分离液进行研磨,随后置于离心机离心,最后吸出中间的淋巴细胞白膜层,获得脾脏单个核细胞。2、BALB/c野生型小鼠脾脏单个核细胞再通过免疫磁珠富集和流式细胞术分选出目的细胞ILC2进行原代培养,再加入细胞因子IL-33和IL-7进行扩增培养十天左右,显微镜观察是否有增殖。3、扩增后的ILC2除去细胞培养基后,加入新的培养基重新悬浮于培养瓶中,之后将收集到的ILC2随机分成四组。每组细胞分别进行转染miR-155agomir、agomir NC(miR-155 agomir对照物)、miR-155 antagomir和antagomir NC(miR-155 agomir对照物)后进行后续实验。qPCR检测各组细胞中miR-155、c-maf的mRNA表达情况。Western Blot检测各组细胞中c-maf蛋白表达情况。ELISA检测各组细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13细胞...

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【学位级别】：硕士

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摘要
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中英文缩略词
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 主要实验设备
        2.1.3 主要溶液配制
        2.1.4 实验动物
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠脾脏单个核细胞分离
        2.2.2 ILC2 免疫磁珠富集
        2.2.3 流式细胞术染色和分选
        2.2.4 ILC2 的原代培养和转染
        2.2.5 实验分组
        2.2.6 qPCR检测细胞中miR-155和c-maf mRNA的水平
        2.2.7 Western Blot检测细胞中cmaf的表达
        2.2.8 ELISA检测各组细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13 的水平
    2.3 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 直接流式分选和经磁珠富集后再流式分选对比
    3.2 经过磁珠富集后的细胞进行流式抗体染色并分选
    3.3 ILC2 的培养和扩增
    3.4 各个分组细胞中miR-155的mRNA表达变化
    3.5 各个分组细胞中c-maf的 mRNA表达变化
    3.6 各个分组细胞中c-maf的蛋白表达变化
    3.7 ELISA检测各个分组细胞上清液中IL-4、IL-5、IL-9和IL-13 的蛋白水平
第4章 讨论
第5章 结论
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3778235