Notch1基因敲除后鼻咽癌细胞放疗敏感性的变化及分子机制

发布时间：2023-04-25 23:10

　　目的:探讨Notch1基因对鼻咽癌细胞放疗敏感性的影响及其分子机制。方法:使用CRISPR/Cas9技术构建敲除Notch1基因的CNE-2细胞(人鼻咽癌细胞株),通过RT-PCR以及Western blot法检测Notch1基因的表达。经不同剂量射线照射处理后,通过计算各组存活分数(SF),使用Linear-quadratic模型计算拟合剂量生存曲线,计算放射增敏比(SER)。以6 Gy为照射剂量,将实验分为4个组:Notch1(+)组、Notch1(-)组、IR+Notch1(+)组和IR+Notch1(-)组。CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡变化,Western blot检测各组细胞γH2AX、CyclinD1、Bax、Bcl-2和GAPDH蛋白的表达差异。结果:敲除Notch1基因的CNE-2细胞系构建成功。CCK-8实验显示,敲除Notch1可提高鼻咽癌放疗敏感性:与IR+Notch1(+)组细胞相比,IR+Notch1(-)组细胞增殖和细胞存活率显著降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双染法...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞系及主要试剂和仪器
    1.2 细胞培养
    1.3 照射条件
    1.4 细胞克隆形成实验
    1.5 CCK-8检测细胞增殖及活力
    1.6 Annexin V-FITC/PI双染法
    1.7 Western blot检测
    1.8 统计学处理
2 结果
    2.1 运用CRISPR/Cas9技术成功敲除CNE-2细胞的Notch1基因
    2.2 敲除Notch1的鼻咽癌细胞放疗后细胞存活分数下降且放疗敏感性增高
    2.3 CCK-8实验结果
    2.4 流式检测细胞凋亡
    2.5 Western blot检测结果
3 讨论



本文编号：3801246