蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关机制研究

发布时间：2017-05-21 09:18

  本文关键词：蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子对喉癌细胞株Hep-2增殖的影响及相关机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：喉癌是人类头颈部常见的恶性肿瘤,来源于喉部黏膜上皮组织,近些年来其发病率有逐渐增长趋势。晚期喉癌患者的5年生存率较低、预后差,影响患者预后重要因素是复发和颈淋巴结转移。以手术切除为主的治疗手段也严重影响术后患者的发声功能以及生存质量,同时肿瘤耐药性也使喉癌的治疗受限,因此寻找有效的喉癌靶向治疗方法是临床的迫切需求。蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A, CIP2A)是新发现的一种癌蛋白,CIP2A通过抑制蛋白磷酸酶2A(proteinphosphatase2A, PP2A)对c-myc基因S62位点的去磷酸化作用,从而阻止c-myc蛋白的降解,稳定c-myc的表达,促进细胞增殖和恶性转化。CIP2A已被证实在肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、胰腺导管腺癌、结肠癌等多种恶性肿瘤中高表达,参与肿瘤的发生发展。我们前期研究中初步证实CIP2A在喉癌组织中高表达,且与肿瘤的分级分期、淋巴结转移、组织分化程度和预后等相关。但目前CIP2A在喉癌中的生物学功能及机理还不清楚。本实验运用siRNA技术沉默Hep-2细胞中CIP2A基因的表达,观察抑制CIP2A基因后对Hep-2细胞增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响及探讨其可能的分子机制,以期为喉癌的早期分子诊断和临床基因治疗提供一定的实验依据。方法：设计合成靶向CIP2A基因的siRNA序列和阴性对照siRNA序列,并转染入喉癌Hep-2细胞,实验分为CIP2A siRNA组与Control siRNA组。平板克隆形成实验检测CIP2A在喉癌细胞增殖中的作用；MTT法检测CIP2A对Hep-2细胞生长曲线及化疗药物顺铂的敏感性的影响；流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布和细胞凋亡率的改变。Real-time PCR检测CIP2A mRNA表达水平,Western blot检测CIP2A及生长相关蛋白c-myc、AKT、p-AKT、cyclinD1的蛋白表达水平。结果：转染CIP2A siRNA后,CIP2A的表达量在转录水平和蛋白水平均显著下调。沉默CIP2A后,Hep-2细胞的生长减缓,细胞克隆的形成能力被抑制,Control siRNA组为339.00+34.00,CIP2A siRNA组为126.00⒈33.00,差异有统计学意义(p＝0.010)；沉默CIP2A可增加喉癌细胞对顺铂的敏感性,Control siRNA组ICso为(6.67±0.54) μg/ml, CIP2A siRNA组为(3.53±0.32) μg/ml,差异有统计学意义(P=0.001)；细胞周期阻滞于G1期,Control siRNA组G1期细胞比例为66.860±1.972, CIP2A siRNA组为74.613±3.357,差异有统计学意义(P=0.026)；S期细胞比例减少,Control siRNA组为23.713±1.564,CIP2A siRNA组为17.747⒈1.255,差异有统计学意义(P=0.007)；沉默CIP2A表达没有引起细胞凋亡率的改变(P=0.216)。Western blot结果显示,沉默CIP2A表达可下调CyclinD1 (P=0.011)、c-myc (P=0.011)、 p-AKT (p=0.010)的表达,但对总AKT蛋白的表达没有影响。结论：沉默Hep-2细胞CIP2A基因后,可有效抑制细胞的增殖,增强细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与下调c-myc、cyclin1、p-AKT的表达有关,提示CIP2A有望成为喉癌基因治疗的潜在靶点。
【关键词】：喉鳞状细胞癌 CIP2A 药物敏感性 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 1 实验材料与方法13-21
• 2 实验结果21-27
• 3 讨论27-30
• 全文结论30-31
• 参考文献31-33
• 文献综述33-45
• 参考文献40-45
• 致谢45-46
• 硕士研究生学习阶段发表的学术论文46

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