LV-EGFP标记兔角膜基质细胞体外基质层移植的实验观察

发布时间：2024-06-02 04:45

　　目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间。方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度,体外动物实验,随机分为2组,实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射,对照组等量生理盐水角膜基质注射,转染后1wk,1mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光,石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态。结果:LV-EGFP转染兔CSCs在倒置荧光显微镜下24h后可见少量荧光,96h和110h荧光较强,转染后的CSCs与正常CSCs细胞形态无明显差异;转染后1wk,1mo实验组中角膜基质层中可见绿色荧光,对照组中无绿色荧光;石蜡切片1wk实验组见明显上皮细胞增生及角膜轻微水肿,少量炎症细胞浸润,转染后1mo实验组上皮细胞增生减弱,未见角膜层水肿;对照组1wk,1mo均未见明显异常。结论:LV-EGFP标记的兔CSCs行体外角膜基质移植,可在角膜中至少存活1mo,且与邻近组织相容性较好。

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【部分图文】：

图5冰冻切片(×100)

图4兔角膜基质注射图(均为右眼)3讨论

图1兔CSCs原代培养(×100)

原代分离兔CSCs,部分细胞24h即可贴壁,7d后即可见细胞散落在培养瓶中,细胞呈梭形,胞核居中,胞浆清亮,10d后细胞铺满培养瓶80%左右,未见上皮或其它杂质细胞,兔CSCs以1∶2～1∶3传代,3d即可传1代(图1)。波形蛋白免疫组化结果:在培养出的细胞中阳性表达,胞浆为棕色....

图2兔CSCs波形蛋白免疫组化(×200)

图1兔CSCs原代培养(×100)图3不同时间点经慢病毒转染的兔CSCs(×100)

图3不同时间点经慢病毒转染的兔CSCs(×100)

图2兔CSCs波形蛋白免疫组化(×200)荧光倒置显微镜下观察兔CSCs,吸出病毒液后24h后可见少量绿色荧光,随着时间的延长,荧光强度逐渐增强,连续观察48、72、96、110h时间点,发现96h和110h时荧光强度在倒置显微镜下较前增强,但两者无明显差异,考虑96h时间短,....

本文编号：3986874