Wnt信号通路调控角膜缘干细胞治疗角膜缘干细胞缺乏症

发布时间：2025-01-05 20:24

　　 背景:Wnt信号通路在干细胞的调控中发挥重要作用,但是其对于角膜缘干细胞的调控作用尚不十分明确。目的:探讨Wnt信号通路对角膜缘干细胞的调控作用及其在角膜缘干细胞缺乏症治疗中的疗效。方法:大鼠角膜缘组织中依次加入Dispase和Trypsin/EDTA进行消化,将消化后的角膜缘干细胞悬液接种于3D-Matrigel微环境中培养,实验组培养体系中加入Wnt信号通路激活剂氯化锂(500μmol/L),对照组不加氯化锂,培养第7天q RT-PCR检测角膜缘干细胞中p63α、CK12、CEBPδ和Ki67的表达,免疫荧光染色检测角膜缘干细胞中β-catenin的表达。采用碱烧伤法建立大鼠角膜缘干细胞缺乏模型,治疗组大鼠结膜下注射激活了Wnt信号通路的角膜缘干细胞,对照组大鼠结膜下注射等量PBS,随后每天使用裂隙灯观察,治疗后第4天取角膜缘组织进行免疫荧光染色、苏木精-伊红染色。结果与结论:①角膜缘干细胞在3D-Matrigel培养微环境中呈球形聚集生长,对照组角膜缘干细胞中β-catenin呈阴性,实验组角膜缘干细胞中β-catenin在细胞浆和细胞核内聚集;②q RT-PCR结果显示:对照组...

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文题释义：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 设计
    1.2 时间及地点
    1.3 材料
        1.3.1 实验动物
        1.3.2 实验试剂及仪器
    1.4 实验方法
        1.4.1 细胞分离及培养
        1.4.2 实时定量PCR检测p63α、CK12、Ki-67和CEBPδ基因表达
        1.4.3 免疫荧光染色检测Wnt信号通路
        1.4.4 克隆形成实验
        1.4.5 角膜缘干细胞缺乏症动物模型的建立及治疗
        1.4.6 苏木精-伊红染色观察角膜缘干细胞缺乏模型大鼠角膜上皮形态
        1.4.7 石蜡切片免疫荧光染色检测角膜组织中Wnt信号通路状态
    1.5 主要观察指标
    1.6 统计学分析
2 结果Results
    2.1 大鼠角膜缘干细胞在3D-Matrigel培养体系中的形态以及角膜缘干细胞中β-catenin的表达
    2.2 Wnt信号通路激活对于角膜缘干细胞干性及增殖能力的影响
    2.3 治疗组与对照组角膜缘干细胞缺乏症大鼠角膜修复情况以及形态学变化
    2.4治疗组与对照组角膜缘干细胞缺乏症大鼠角膜组织中β-catenin的表达
3 讨论Discussion



本文编号：4023214