烟酸对氧诱导新生小鼠视网膜病变的保护作用及机制的研究

发布时间：2017-06-10 19:05

  本文关键词：烟酸对氧诱导新生小鼠视网膜病变的保护作用及机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察烟酸对氧诱导新生小鼠视网膜病变是否具有保护作用,并探索其相关的机制。方法:建立氧诱导新生小鼠视网膜病变模型:出生第7天(P7)C57 BL/6J新生小鼠80只随机均分为常氧对照组(RA)、常氧烟酸干预组(RA+Niacin)、单纯氧诱导视网膜病变组(OIR)和OIR烟酸干预组(OIR+Niacin),每组20只。两组OIR新生小鼠P7连同母鼠放入75%±1%氧浓度的氧舱中,P12取出放回正常空气中再饲养5天,烟酸干预组母鼠饲以含质量比0.5%烟酸的饲料,从幼鼠P7时开始喂食母鼠至P17。烟酸为水溶性维生素,可通过乳汁分泌,幼鼠按需吸允含有烟酸的乳汁。各组新生小鼠均于P17深度麻醉后经含肝素PBS心脏灌注去除视网膜血管中血液后取右眼提取完整视网膜冻于-80℃冰箱保存,取左眼固定后行石蜡包埋、OCT包埋、视网膜铺片Isolectin IB4染色。免疫荧光检测各组新生小鼠视网膜中3-硝基酪氨酸(3-NT)、对氧磷酶2(PON2)和胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)表达;荧光探针CellROX?Green氧化应激试剂检测各组活性氧自由基(ROS)水平;石蜡切片HE染色定量突破内界膜新生血管内皮细胞核数目;荧光标记的Isolectin IB4视网膜铺片染色观察各组小鼠全视网膜中央缺血无灌注区(VO)和病理性新生血管区(NV)变化;TUNEL染色检测视网膜组织细胞凋亡情况;Western blot测定各组视网膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子(HIF-1a)、PON2和GFAP的表达,并通过检测白蛋白Albumin的表达评判各组视网膜血管渗漏情况。结果:免疫荧光染色显示OIR组视网膜GFAP标记的müller细胞活化,烟酸可逆转GFAP表达的增加;同样荧光显示,PON2在视网膜müller细胞上有表达,烟酸可进一步上调PON2的表达起到抗氧化作用;HE染色和IB4血管染色结果表明,烟酸可抑制OIR小鼠视网膜血管异常;从蛋白水平上看,烟酸同样可以逆转单纯氧诱导视网膜病变组VEGF、HIF-1a、GFAP和Albumin的升高,而抗氧化酶PON2蛋白水平因烟酸的干预较未干预组进一步升高;Cell ROX和3-NT检测结果表明,活性氧自由基和蛋白硝基化水平在单纯OIR组均增加,烟酸干预后可减少ROS/RNS的产生;TUNEL检测结果显示OIR组视网膜TUNEL(+)核细胞数增加,而喂食烟酸的OIR小鼠视网膜阳性染色数有所下降,以内核层下降最明显。结论:本研究表明烟酸对氧诱导新生小鼠视网膜病变具有保护作用,其机制可能是通过抗氧化应激来抑制新生血管生成和实现神经保护,其中HIF-1a/VEGF信号通路可能参与其中。
【关键词】：烟酸 氧诱导的视网膜病变 氧化应激 神经血管保护
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料和方法14-27
• 2.1 实验材料14-18
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 抗体14
• 2.1.3 主要试剂14-15
• 2.1.4 主要仪器15-16
• 2.1.5 溶液配制16-18
• 2.2 实验方法18-27
• 2.2.1 建立新生小鼠氧诱导的视网膜病变动物模型18-19
• 2.2.2 小鼠心脏灌注19-20
• 2.2.3 小鼠视网膜石蜡切片制备及HE染色20-21
• 2.2.4 小鼠视网膜铺片制备Isolectin GS-IB4染色21-22
• 2.2.5 小鼠视网膜冰冻切片制备及免疫荧光染色22
• 2.2.6 小鼠视网膜冰冻切片TUNEL染色22-23
• 2.2.7 小鼠视网膜荧光探针Cell ROX染色23
• 2.2.8 视网膜蛋白提取及SDS-PAGE电泳23-26
• 2.2.9 统计分析26-27
• 第3章 结果27-34
• 3.1 烟酸抑制OIR小鼠视网膜病理性血管生成27-29
• 3.1.1 烟酸减少突破OIR小鼠视网膜内界膜新生血管内皮细胞核数27
• 3.1.2 烟酸减少OIR幼鼠全视网膜中央缺血无灌注区（VO）和病理性新生血管区（NV）的面积27-29
• 3.2 烟酸抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜中活性氧自由基（ROS）和 3-硝基酪氨酸（ 3-NT）的表达29-30
• 3.3 烟酸抑制OIR小鼠视网膜HIF-1a和VEGF蛋白的表达，并通过抑制Albumin蛋白水平而减轻缺氧诱导的视网膜渗漏30-31
• 3.4 对氧磷酶2在各组小鼠视网膜定位和表达，烟酸上调其表达水平。31-32
• 3.5 烟酸抑制高氧诱导的视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达32-33
• 3.6 烟酸可减少 OIR 小鼠视网膜细胞的凋亡33-34
• 第4章 讨论34-39
• 第5章 结论与展望39-40
• 5.1 结论39
• 5.2 进一步工作的方向39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-53
• 参考文献49-53

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本文编号：439542