EZH2相互作用蛋白筛选及鉴定

发布时间：2017-06-10 21:10

  本文关键词：EZH2相互作用蛋白筛选及鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:筛选并鉴定鼻咽癌细胞中EZH2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)的相互作用蛋白,探讨EZH2在鼻咽癌形成与进展中的作用机制。方法:1.通过构建Flag-EZH2病毒表达质粒,利用慢病毒系统获得过表达Flag-EZH2的5-8F细胞系,并提取其细胞核蛋白。2.采用免疫共沉淀结合凝胶电泳分离EZH2相互作用蛋白,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术鉴定相互作用蛋白。3.选取RBMX和TF1蛋白,通过免疫共沉淀和Western Blot的方法再次验证与EZH2的相互作用。结果:1.构建Flag-EZH2病毒表达质粒,获得过表达EZH2的5-8F细胞系,提取了此细胞系的胞核蛋白。2.筛选出17中可能与EZH2相互作用的蛋白。3.验证RBMX蛋白与EZH2蛋白之间不存在相互作用,而TF1蛋白(本实验室自编代号蛋白)与EZH2蛋白之间存在相互作用。结论:1.本研究采用免疫共沉淀结合质谱分析在鼻咽癌细胞中鉴定了EZH2相互作用蛋白,为进一步研究EZH2蛋白的功能提供了实验依据。2.TF1蛋白与EZH2蛋白在鼻咽癌细胞中相互作用,可能与鼻咽癌的发生、发展存在重要的联系。
【关键词】：EZH2 相互作用蛋白 鼻咽癌 免疫共沉淀 质谱
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-6
• ABSTRACT6-7
• 英汉缩略词对照表7-8
• 前言8-10
• 1 材料与方法10-21
• 1.1 实验材料与仪器10
• 1.2 主要实验试剂10-11
• 1.3 主要实验仪器11-12
• 1.4 实验方法12-18
• 1.5 实验主要试剂配制18-21
• 2 结果21-28
• 2.1 EZH2相互作用蛋白的质谱鉴定21-25
• 2.1.1 EZH2基因克隆及其病毒表达质粒的构建与鉴定21
• 2.1.2 过表达Flag-EZH2的鼻咽癌细胞系构建21-22
• 2.1.3 EZH2相互作用蛋白的纯化与分离22-23
• 2.1.4 质谱鉴定EZH2相互作用蛋白23-25
• 2.2 EZH2相互作用蛋白验证25-28
• 2.2.1 RBMX与EZH2相互作用验证25-26
• 2.2.2 TF1与EZH2相互作用验证26-28
• 3 讨论28-30
• 3.1 EZH2相互作用蛋白的研究背景及意义28-29
• 3.2 免疫共沉淀结合MALDI-TOF-MS筛选相互作用蛋白29-30
• 3.3 验证筛选蛋白30
• 4 结论30-31
• 参考文献31-33
• 综述33-42
• 参考文献39-42
• 攻读学位期间发表的学术论文目录42-43
• 致谢43

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本文编号：439902