靶向PDGFR-α的RNA干扰对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-06-13 15:13

  本文关键词：靶向PDGFR-α的RNA干扰对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究靶向PDGFR-α的RNA干扰对体外人视网膜色素上皮(hRPE)细胞增殖和凋亡的影响,为临床治疗增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)提供实验依据。方法:体外培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞,利用阳离子脂质体(Lipofectammine TM2000)将化学合成的PDGFR-αshRNA转染入hRPE细胞,倒置光学显微镜下观察hRPE细胞的形态学改变,按照转染物的不同分为4组,即空白对照组;阴性对照(NC-shRNA)组;1.0μg/ml PDGFR-αshRNA组;2.0μg/ml PDGFR-αshRNA组。PDGFR-αshRNA作用于hRPE细胞24h、48h、72h后,MTT法检测RPE细胞增殖的变化,并计算抑制率;PDGFR-αshRNA作用h RPE细胞48h后,RT-PCR法检测hRPE细胞中PDGFR-αmRNA的表达变化,应用Western blot和免疫组化技术检测PDGFR-α的蛋白表达水平;Hoechst33258荧光染色分析细胞的凋亡情况;流式细胞仪检测PDGFR-αshRNA对hRPE细胞周期和凋亡的影响。结果:PDGFR-αshRNA转染hRPE细胞48h后,实验组细胞出现细胞皱缩,间隙增宽,贴壁不牢及大量死亡细胞漂浮等现象,与低浓度用药组相比,高浓度用药组细胞出现细胞皱缩,核碎裂,死亡细胞漂浮现象更明显。PDGFR-αshRNA作用于hRPE细胞24-72h,hRPE细胞的增殖受到抑制,且抑制作用随浓度的升高和时间的延长而增强,转染后24、48、72h,实验组细胞抑制率分别为(9.4±0.03;20.9±0.02;32%±0.01)%、(14.9±0.15;31.3±0.01;51.7±0.01)%与空白对照组(0;0;0)%和NC-shRNA组(1.7±0.04;2.6±0.02;2.4±0.01)%相比,差异有统计学意义(P0.05)。PDGFR-αshRNA作用hRPE细胞48h后,PDGFR-α基因的mRNA和蛋白表达与对照组相比明显下调,并随药物浓度的升高而增强,差异有统计学意义(P0.05);PDGFR-αshRNA作用hRPE细胞48h后,荧光染色结果显示:实验组细胞出现核致密浓染、核分裂等细胞调亡的形态学改变与对照组相比明显增多,流式细胞仪对细胞凋亡的检测结果显示PDGFR-αshRNA作用下细胞凋亡率与对照组相比明显升高,实验组细胞凋亡率分别为:(37.2±1.73)%、(51.8±1.41)%,与对照组(11.5±0.95)%和NC-shRNA组(13.8±1.61)%相比较,差异有统计学意义(P0.05),流式细胞仪对细胞周期检测结果显示PDGFR-αshRNA作用下细胞被阻滞于G1期,实验组G1期细胞百分率分别为:(64.44±1.13)%,(75.99±0.84)%,与空白对照组(54.11±1.13)%和NC-shRNA组(55.53±1.81)%相比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.PDGFR-αshRNA能抑制hRPE细胞的增殖,诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期。2.PDGFR-αshRNA可能通过沉默hRPE细胞中PDGFR-α基因的表达来发挥其防治PVR的作用。
【关键词】：PDGFR-α RNA干扰 视网膜色素上皮细胞 增殖 增殖性玻璃体视网膜病变
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 符号说明10-11
• 前言11-14
• 1 材料与方法14-26
• 2 结果26-32
• 3 讨论32-38
• 4 结论38-39
• 参考文献39-45
• 综述45-58
• 参考文献54-58
• 攻读学位期间发表的学术论文58-59
• 致谢59-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 熊蕾;权颜龙;郑玉萍;张利敏;张璐琰;熊全臣;;血小板源性生长因子受体α在兔增殖性玻璃体视网膜病变中的作用(英文)[J];国际眼科杂志;2008年01期

2 倪琦;曾思恩;谭宁;郭芳;张美艳;;姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及凋亡的影响[J];山东医药;2010年07期

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本文编号：446878