利用细胞因子抗体芯片技术研究鬼针草调控干眼症免疫性炎症信号转导机制

发布时间：2017-06-29 00:06

  本文关键词：利用细胞因子抗体芯片技术研究鬼针草调控干眼症免疫性炎症信号转导机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的：本研究利用细胞因子抗体芯片技术检测,结合眼表角结膜组织超微结构和炎症因子及凋亡基因检测,明确鬼针草通过哪些关键细胞因子调控治疗干眼症的炎症和凋亡信号转导通路,从分子水平探讨鬼针草治疗干眼症的机制。研究内容：①建立两种类型大鼠干眼症模型：应用阿托品眼液抑制泪液分泌制作泪液分泌缺乏型干眼模型,烧灼封闭睑板腺口制作泪液蒸发过强型干眼模型。②大鼠造模前后,鬼针草治疗前后检测泪液和泪膜变化及结膜和泪腺组织超微结构变化。③采用免疫组化(SP法)观察造模前后、鬼针草治疗前后结膜和泪腺组织炎症因子(IL-1、TNF-α)及凋亡基因(bcl-2, Bax)的表达。④应用细胞因子抗体芯片(RayBioTM细胞因子芯片),分别对两种类型干眼症中鬼针草治疗组和生理盐水对照组的大鼠泪液中有表达细胞因子进行差异分析,推导鬼针草通过哪些因子参与免疫炎症信号转导,从分子水平阐明鬼针草多靶点治疗干眼症的的机制。研究结果：从统计学的意义上来看,用阿托品眼液大鼠干眼症模型在应用其进行使用的之前和之后从泪液的整体流量上来看并没有明显的差异(P0.05),而这差异主要反映在泪膜的具体破裂的时间的不同(P0.01)；并通过对比上皮细胞当中存在的TNF-α以及Fas等可以看出明显的变化,特别是Fas已经明显少了很多阳性,而且存在非常大的不同(P0.01),IL也相对少了很多,而且存在非常大的不同(P0.05)。②从统计学的意义上来看,封闭睑板腺大鼠干眼症模型组治疗前后泪液流量的对比(P0.05),而这差异反映在泪膜的具体破裂的时间方面没有太大的差别(P0.05)。封闭条件下的睑板腺大鼠干眼这种症状的情况来看,对比其前后并没有明显的不一样(P0.05)。经细胞因子抗体芯片技术定量检测,两组干眼症模型的泪液中MMP-8、IL-1 beta、IL-4、 IL-10、Fas Ligand、CINC-3、CNTF这7中细胞因子表达有差异,P0.05。而鬼针草治疗后,阿托品干眼症模型组中,Fas Ligand、IL-1 beta、IL-4、IL-10、CINC-3、CNTF较治疗前有差异性表达,P0.05,其中Fas Ligand与CNTF表达差异性显著,P0.01；封闭睑板腺口干眼症模型组中,仅有IL-1 beta表达有显著性下降,P0.05。研究结论：针对干眼症方面的治疗来说,鬼针草是有一定条件限制的,其对于封闭睑板腺口这种情况并不能产生作用。目前仅适用与阿托品滴眼的性状。鬼针草通过IL-1 beta、IL-4、 IL-10、CINC-3、CNTF差异表达转导信号,可以明显改善由以上细胞因子介导的阿托品点眼形成的泪液分泌缺乏型干眼症,而对封闭睑板腺口形成的蒸发过强型干眼症,只对IL-1beta的影响,治疗效果不明显。因此认为,鬼针草通过IL-1 beta、IL-4、IL-10、CINC-3、 CNTF、Fas Ligand细胞因子的转导,发挥治疗干眼症的作用,其中阿托品组中Fas Ligand引导的细胞凋亡通路作用大于炎症因子信号通道；封闭睑板腺组泪腺组织中IL-1 beta信号转导起主要作用。
【关键词】：干眼症 鬼针草 细胞凋亡 炎症因子 细胞因子抗体芯片技术
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R777.34
【目录】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一部分 前言与理论研究11-17
• 1. 立项依据11-13
• 2. 理论研究13-15
• 2.1 祖国医学对干眼症的认识13
• 2.2 鬼针草的相关研究13-14
• 2.3 干眼症的治疗现状14-15
• 3. 细胞凋亡和炎症因子15
• 4. 细胞因子抗体芯片技术15-17
• 第二部分 干眼症动物模型的建立及角结膜和泪腺组织超微结构变化17-21
• 一、实验目的17
• 二、材料与方法17-18
• 1. 泪液分泌缺乏型干眼模型17-18
• 2. 封闭睑板腺口干眼兔模型的建立18
• 三、实验结果18-21
• 1. 阿托品凝胶点眼干眼模型18
• 2. 封闭睑板腺口模型18-21
• 第三部分 干眼结膜及泪腺组织中细胞凋亡和炎症因子的观察21-29
• 一、实验目的21
• 二、材料与方法21-25
• 1. 材料21
• 2. 主要科研设备、仪器及试剂21
• 3. 检测方法21-25
• 4. 统计学方法25
• 三、实验结果25-29
• 1. 阿托品眼液干眼症模型组25-26
• 2. 封闭睑板腺口干眼症模型26-27
• 3. 细胞因子抗体芯片检测27-29
• 第四部分 鬼针草治疗干眼症模型的疗效观察29-33
• 一、实验目的29
• 二、材料与方法29
• 1. 分组与材料29
• 2. 主要药物配比29
• 3. 主要实验材料及仪器同上一部分29
• 4. 实验方法29
• 5. 统计学处理29
• 三.实验结果29-33
• 1. 泪流量及BUT检查29-30
• 2. 促凋亡因子与炎症因子30-31
• 3. 细胞因子芯片抗体检测31-33
• 第五部分 讨论33-37
• 1. 结果分析33
• 2. 细胞凋亡与炎症因子33-34
• 3. 细胞因子抗体芯片技术34-37
• 附录37-38
• 参考文献38-40
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果40-41
• 致谢41

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 姚茂兴,黄丽娜,成洪波;SELDI蛋白质芯片及其在眼表疾病中的应用[J];国外医学(眼科学分册);2005年03期

2 李桥;施炜;王育良;严士海;张传伟;黄晶晶;;鬼针草治疗局部滴用阿托品的兔干眼疗效评价[J];江苏中医药;2009年05期

3 王黎;李凯;华永庆;张传伟;王育良;;鬼针草水提液对豚鼠回肠肌M受体的作用及机制研究[J];江苏中医药;2011年01期

4 李馨源;郭梦虎;宗蕾;;电针及耳尖放血疗法治疗干眼症疗效观察[J];上海针灸杂志;2013年12期

5 宁立法;苏英娟;;中西医结合对干眼症患者的临床疗效观察与分析[J];中国现代医生;2011年09期

6 李凯;王育良;黄晶晶;王友法;;中药润目灵治疗水样液缺乏性干眼症的临床研究[J];中国中医眼科杂志;2009年06期

7 蔡晓红;杨瑶华;郑浩;;杞菊地黄丸辅助玻璃酸钠治疗干眼症的疗效观察[J];中国疗养医学;2013年12期

  本文关键词：利用细胞因子抗体芯片技术研究鬼针草调控干眼症免疫性炎症信号转导机制，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：495781