miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究

发布时间：2017-06-29 05:04

  本文关键词：miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4(PDCD4)促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭,进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3—6月,培养鼻咽癌细胞株CNE-2,取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列,连接到含有荧光素酶载体质粒上,检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度(OD)值,反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-150inhibitors、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为(0.975±0.112),miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为(0.588±0.042),差异有统计学意义(t=7.853,P=0.018)。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为(0.992±0.135),miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为(0.875±0.095),差异无统计学意义(t=1.461,P=0.281)。转染Vector、pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为(0.655±0.058)、(1.147±0.152)、(0.704±0.068)、(0.313±0.036),差异有统计学意义(F=43.410,P0.001);其中,转染Vector、miR-ctr、miR-150mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平均低于转染pc DNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义(P0.05)。转染物和时间对CNE-2增殖能力存在交互作用,转染物和时间对CNE-2增殖能力均存在主效应(P0.001)。转染Vector、pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2穿膜细胞数分别为(56.6±7.5)、(26.5±3.7)、(30.5±4.7)、(55.2±6.9)个,差异有统计学意义(F=18.550,P=0.014);其中,转染pc DNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors的CNE-2穿膜细胞数少于转染Vector、miR-150 mimics联合pc DNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-150通过抑制PDCD4的表达,继而增强鼻咽癌细胞的增殖能力和侵袭能力。
【作者单位】： 南华大学附属第二医院耳鼻咽喉科;南华大学肿瘤研究所;
【关键词】： 鼻咽肿瘤 miR- 程序性细胞死亡因子 细胞增殖 侵袭
【基金】：国家自然科学基金青年基金资助项目(81100568) 湖南省科技计划项目(2014SK3081)
【分类号】：R739.63
【正文快照】： miRNA是长21~25 nt具有调控功能的单链非编码小RNA,在进化过程中高度保守,是近年来生物医学领域研究的热点[1]。miRNA通过与靶基因mRNA的3'非编码区(3'UTR)完全或不完全碱基配对,致使靶基因mRNA降解或其蛋白翻译受抑制,从而负向调控转录水平。研究表明,miR-150在胰腺癌、食管

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