LncRNA-RNCR2对糖尿病视神经病变的调控作用研究

发布时间：2017-07-20 21:04

  本文关键词：LncRNA-RNCR2对糖尿病视神经病变的调控作用研究

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【摘要】：目的：探究长链非编码RNA-RNCR2在糖尿病性视神经病变过程中的调控作用及作用机制。方法：1、首先通过腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)构建大鼠糖尿病模型,实验分为四组：正常SD大鼠、4 W STZ-SD大鼠、8 W STZ-SD大鼠和12 WSTZ-SD大鼠,qRT-PCR检测各组视网膜中RNCR2的表达水平；构建视神经节细胞(Retinal ganglion cell, RGC)和Muller细胞的高糖损伤模型,实验分四组：正常浓度葡萄糖(5mmol/L)、高浓度葡萄糖(30mmol/L) 24h、高浓度葡萄糖(30mmol/L) 48 h和高浓度葡萄糖(30mmol/L) 72h, qRT-PCR检测各组细胞中RNCR2的表达水平。2、通过腹腔注射STZ构建大鼠糖尿病模型,实验分为四组：正常SD大鼠、12 W STZ-SD大鼠、敲除RNCR2的12 W STZ-SD大鼠、敲除Scr-siRNA的12 WSTZ-SD大鼠,采用免疫荧光检测各组大鼠视网膜中Muller细胞蛋白标记物GFAP、GS,RGC蛋白标记物Neun、TUBB3,双极细胞：PKC-α、水平细胞：Calbindin和无长突细胞：Calretinin的表达情况。3、利用高浓度葡萄糖(30mmol/L)构建RGC、Muller细胞高糖模型,实验分四组：对照组、高糖刺激组、下调Scr-siRNA的高糖刺激组、下调RNCR2的高糖刺激组。利用200 μmol/L H2O2构建RGC、Muller细胞氧化应激模型,实验分四组：对照组、H202刺激组、下调Scr-siRNA的H202刺激组、下调RNCR2的H2O2刺激组。采用MTT实验检测各组细胞的活力；采用Hoechst染色、JC-1染色和PI/Calcein-AM染色检测各组细胞凋亡和死亡情况；采用细胞免疫荧光染色Ki-67检测各组细胞的增殖情况。4、机制研究：通过Western blots技术检测脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和重组人神经营养蛋白-3(NT-3)在大鼠视网膜中的表达水平。结果：1、在大鼠视网膜组织、RGC细胞和Muller细胞中均有RNCR2表达,且随着STZ-SD大鼠、RGC细胞和Muller细胞在高糖环境下时间的延长,RNCR2的表达逐渐增加。2、糖尿病大鼠视网膜中NeuN和TUBB3表达下降,GFAP和GS表达增加；下调RNCR2后NeuN、TUBB3表达进一步下降,GFAP和GS表达下降；PKC-α、 Calbindin和Calretinin的表达无显著变化。3、RGC和Muller细胞给予高糖或H202刺激后,细胞活力和增殖能力均下降,细胞死亡和凋亡数量增加；下调两种细胞RNCR2的表达并给予高糖或H202刺激后,细胞活力和增殖能力进一步下降,细胞死亡和凋亡数量进一步增加。4、糖尿病大鼠视网膜组织中BDNF、NT-3和NGF表达增加,敲除RNCR2后BDNF、NT-3和NGF表达明显下降。结论：糖尿病视神经病变会诱导RNCR2的表达,RNCR2表达上调通过促进Muller细胞的胶质化和神经营养因子分泌起到对糖尿病视神经病变的保护作用。
【关键词】：LncRNA-RNCR2 糖尿病 视神经病变 视网膜神经节细胞 M(u|")ller细胞
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-29
• (一) 实验对象12
• (二) 主要实验仪器12-13
• (三) 主要实验试剂13-14
• (四) 主要试剂的配制14-17
• (五) 实验方法17-29
• 结果29-46
• (一) 高血糖处理诱导RNCR2表达的上调29-31
• (二) 下调RNCR2加重糖尿病对大鼠视网膜的损伤作用31-35
• (三) RNCR2下调对RGC和Muller细胞的功能影响35-44
• (四) 下调RNCR2,Muler细胞分泌神经营养因子减少44-46
• 讨论46-49
• 结论49-50
• 参考文献50-53
• 文献综述53-66
• 参考文献62-66
• 附录一 中英文缩略词66-67
• 攻读学位期间发表文章情况67-68
• 致谢68

【参考文献】

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1 李维业,刘熙朴,叶晓丹;Retinal　capilary　pericyte　apoptosis　in　early　human　diabetic　retinopathy[J];Chinese Medical Journal;1997年09期

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本文编号：569954