β-catenin过表达鼻咽癌CNE2细胞模型的构建
发布时间：2017-08-06 00:03
本文关键词：β-catenin过表达鼻咽癌CNE2细胞模型的构建
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【摘要】：目的构建β-catenin真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin并转染鼻咽癌CNE2细胞,检测β-catenin在CNE2细胞中的表达。方法反转录-聚合酶链式扩增反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增目的基因β-catenin,胶回收纯化后克隆至p GEM-T Easy载体,挑选阳性克隆,抽提质粒进行kpn I/xba I双酶切和PCR鉴定,用T4 DNA连接酶将目的基因β-catenin与真核表达载体pc DNA3.1/Hygro(+)连接,构建重组的真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin,转化感受态细胞DH5α,再次抽提质粒进行PCR、kpn I/xba I双酶切和测序鉴定,然后用Fu GENE HD将纯化的pc DNA3.1(+)/β-catenin转染入鼻咽癌CNE2细胞,经Hygromycin B筛选,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)验证转染细胞CNE2/β-catenin中β-catenin的表达。结果 PCR、双酶切及测序鉴定表明,成功构建了真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin;实时荧光定量PCR和Western blot检测表明,与未转染细胞CNE2比较,被转染的CNE2/β-catenin细胞能够上调目的基因β-catenin的表达(P0.01)。结论成功构建真核表达载体pc DNA3.1(+)/β-catenin,并能在转染的CNE2/β-catenin细胞上调目的基因β-catenin的表达。
【作者单位】： 福建省科技厅转化医学重点实验室福建医科大学教学医院福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室;
【关键词】： 鼻咽肿瘤 真核表达载体 β-catenin 细胞模型
【基金】：福建省自然科学基金资助项目(2014J01299) 福建省科技计划重点项目(2014Y0014) 国家临床重点专科建设项目[国卫办医函(2013)554号]
【分类号】：R739.63
【正文快照】： 林可q4苏颖何火聪邹长h瓿鲁，
本文编号：627482
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