稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建

发布时间：2017-08-09 03:19

  本文关键词：稳定过表达XAF1基因鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株的构建

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【摘要】：目的构建稳定过表达X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。方法分别将携带XAF1基因感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50的慢病毒稀释液、MOI为100的慢病毒原液和MOI为100的慢病毒原液加入终浓度为5μg/m L的聚凝胺(polybrene)转染人鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。通过倒置荧光显微镜观察细胞内荧光数量及强度评判转染效率,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reversetranscription polymerase chain reaction,q RT-PCR)和蛋白免疫印记法(western blot)检测XAF1基因m RNA和蛋白的表达。结果慢病毒稀释液转染,约60%的细胞可观察到微弱荧光;慢病毒原液转染,约70%的细胞观察到较弱荧光;慢病毒原液加入5μg/m L polybrene的转染效率较高,约90%的细胞观察到较强荧光。嘌呤霉素筛选上述转染效率最高的慢病毒原液加5μg/m L polybrene组细胞,其成功将携带XAF1基因的慢病毒转入鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。q RT-PCR和western blot进一步证实细胞株稳定过表达XAF1基因。结论慢病毒加polybrene转染可成功构建稳定过表达XAF1基因的鼻咽癌放射抗拒CNE-2R细胞株。
【作者单位】： 广西医科大学附属肿瘤医院放疗科;广西医科大学研究生院;
【关键词】： 鼻咽肿瘤 X连锁凋亡抑制蛋白相关因子 慢病毒载体 鼻咽癌放射抗拒细胞 基因转染 荧光效率
【基金】：区域性高发肿瘤早期防治研究广西重点实验室研究资助项目(GK2015-ZZ07) 广西医科大学青年科学基金资助项目(GX-MUYSF201317)
【分类号】：R739.63;R730.55
【正文快照】： X连锁凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitorof apoptosis associated factor 1,XAF1)是一种运用酵母双杂交法发现的新的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linkedinhibitor of apoptosis protein,XIAP)的拮抗蛋白。XAF1基因定位于染色体17p13.2位点,通过拮抗XIAP的抗凋亡作用而发挥抗

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本文编号：643297