Notch基因转染体外培养的兔角膜内皮细胞调控其增殖分化的研究

发布时间：2017-08-21 20:14

  本文关键词：Notch基因转染体外培养的兔角膜内皮细胞调控其增殖分化的研究

  更多相关文章： 角膜内皮细胞 转染 Notch 分化 增殖

【摘要】：本文旨在选出Notch家族成员中表达最强的基因,将该基因通过慢病毒载体介导转入体外培养的兔角膜内皮细胞中,研究转基因的兔角膜内皮细胞增殖及分化的转变,探讨运用转基因技术治疗角膜内皮细胞病的可能。通过撕取后弹力层法培养兔角膜内皮细胞;逆转录PCR扩增目的基因片段选出Notch家族各成员中表达最强的基因,构建重组慢病毒载体转染体外培养的的兔角膜内皮细胞,运用MTT法、免疫荧光、RT-PCR、倒置显微镜等方法观察记录兔角膜内皮细胞的增殖及分化情况.撕取后弹力层体法可获得较纯净的单层兔角膜内皮细胞。Notch家族中的受体Notch2、Notch3及配体Delta1、Jagged1在兔角膜内皮细胞中有表达,且Notch3表达最强。慢病毒载体在MOI=100时,转染体外培养的兔角膜内皮细胞72h后其转染效率高达60%以上。Notch3基因的转染使与内皮细胞分化相关的a-SMA、增殖相关的Ki-67基因的表达增强,细胞连接标志基因ZO-1、N-cadherin的表达降低。慢病毒介导的Notch3基因可成功转入体外培养的兔角膜内皮细胞中并稳定表达,Notch3基因的过表达提高了Notch信号通路对兔角膜内皮细胞的增殖和分化的调控能力,该过程可被γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断。为转基因技术治疗角膜内皮细胞病提供了新思路。
【关键词】：角膜内皮细胞 转染 Notch 分化 增殖
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R772.2
【目录】：

• 中文摘要4-5
• 英文摘要5-8
• 第一章 绪论8-10
• 第二章 材料与方法10-16
• 1．实验材料10-12
• 2.实验方法12-15
• 3.统计学分析15-16
• 第三章 实验结果16-22
• 1.Notch 家族成员在兔角膜内皮细胞中的表达情况16
• 2.慢病毒转染效率16-17
• 3. 细胞形态学观察17-18
• 4．MTT 法检测兔角膜内皮细胞转基因前后增殖能力18-19
• 5. 相关基因及蛋白表达水平的变化19-22
• 第四章 讨论22-26
• 第五章 结论26-28
• 参考文献28-32
• 综述32-42
• 参考文献37-42
• 发表论文42-44
• 致谢44

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 卢友光;杨春桃;丁林灿;佘林;;涎腺腺样囊性癌转移细胞株的Notch基因表达[J];福建医科大学学报;2008年01期

2 ;[J];;年期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 罗甜;Notch基因转染体外培养的兔角膜内皮细胞调控其增殖分化的研究[D];南华大学;2015年

，

本文编号：714875