Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选

发布时间：2017-08-21 20:32

  本文关键词：Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型葡萄糖浓度和培养时间的筛选

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【摘要】：目的筛选Wistar大鼠视网膜神经元高糖模型的葡萄糖浓度及培养时间。方法取出生1~3 d Wistar大鼠分离视网膜神经元进行传代培养,尼氏染色法鉴定细胞;实验分5组:A组培养液葡萄糖浓度为0 mmol·L~(-1)(正常对照组),B组浓度为10 mmol·L~(-1),C组浓度为15 mmol·L-1,D组浓度为25 mmol·L~(-1),E组浓度为35 mmol·L~(-1)。分别培养24 h、48 h、72 h后用MTT法检测各组细胞OD值,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果倒置显微镜观察分离培养细胞,大部分细胞于接种24 h后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并有向中央聚集生长的现象。2~3 d后长出突起的神经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞体长度的1倍。培养5~7 d后神经元突起进一步增多、变长。经尼氏染色后细胞质呈蓝紫色,尼氏小体颗粒状结构清晰。非神经元细胞胞质基本不着色,细胞核呈淡紫色、圆形,核仁清晰可辨,神经元率达91%。各实验组在培养24 h后OD值均低于正常对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。随培养时间延长OD值继续下降,48 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P0.05);D组OD值明显下降,与A组比较差异有统计学意义(P0.05),E组下降更明显,与A组比较差异有统计学意义(P0.01)。72 h后各组OD值比较差异有统计学意义(P0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P0.05);D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P0.01)。各组在培养24 h后视网膜神经元凋亡率差异无统计学意义(P0.05)。48 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P0.05);D组凋亡率明显升高,与A组比较差异有统计学意义(P0.05);E组凋亡率升高更明显,与A组比较差异有统计学意义(P0.01),且与D组比较亦有统计学意义(P0.05)。72 h后各组凋亡率比较差异有统计学意义(P0.01);其中B组及C组与A组比较差异无统计学意义(均为P0.05),D组及E组与A组比较差异有统计学意义(均为P0.01)。结论葡萄糖浓度为25 mmol·L~(-1)培养48 h是视网膜神经元高糖模型最佳葡萄糖浓度及干预时间。
【作者单位】： 赤峰学院附属医院眼科;
【关键词】： 大鼠视网膜神经元细胞 高糖模型 葡萄糖浓度 培养时间
【基金】：国家自然科学基金地区项目(编号:61465001)~~
【分类号】：R587.2;R774.1
【正文快照】： 糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是胞于接种24 h后贴壁,少数细胞长出较短的突起,并世界范围内主要的致盲眼病,视网膜神经元是视网有向中央聚集生长的现象。2~3 d后长出突起的神膜光感受器及神经信息传递功能的执行者,各种致病经元数目增多,突起长度增加,约为自身胞，

本文编号：714967