黄芪多糖对人视网膜色素上皮细胞ARPE-19抗氧化保护作用的研究

发布时间：2017-08-22 09:05

  本文关键词：黄芪多糖对人视网膜色素上皮细胞ARPE-19抗氧化保护作用的研究

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【摘要】：目的应用过氧化氢建立体外人视网膜色素上皮细胞ARPE-19细胞氧化应激损伤模型,并应用黄芪多糖(APS)干预,观察APS对ARPE-19的抗氧化保护作用,并通过细胞凋亡途径研究黄芪多糖对ARPE-19细胞抗氧化保护作用的机制。方法实验共分三个部分。第一部分是ARPE-19细胞的培养以及研究黄芪多糖的安全浓度,体外培养ARPE-19细胞,给予不同浓度的黄芪多糖干预,通过MTT检测细胞存活率,并确定合适的黄芪多糖安全浓度。第二部分是应用过氧化氢处理ARPE-19细胞,制造细胞的氧化应激损伤模型,并确定合适的过氧化氢浓度。第三部分是应用黄芪多糖干预过氧化氢处理的ARPE-19细胞,并应用MTT检测细胞存活率,DAPI染色观察细胞核的状态,实时细胞电子分析系统实时检测细胞的生长状态,caspase-3检测试剂盒检测各组caspase-3的表达水平。结果1.250μg/ml、500μg/ml和1000μg/ml为黄芪多糖的安全浓度。2.外源性过氧化氢处理下,ARPE-19细胞存活率逐渐下降,提示过氧化氢可以诱导ARPE-19细胞的氧化应激损伤,过氧化氢的合适作用浓度为200μM。3.过氧化氢损伤组细胞皱缩,悬浮细胞增多,APS干预后细胞状态改善。过氧化氢损伤组细胞存活率比正常对照组显著降低(P0.05),不同浓度黄芪多糖干预后,细胞存活率升高,与过氧化氢损伤组相比差异具有显著地统计学意义(均为P0.05)。DAPI染色显示正常细胞核均匀淡染,过氧化氢损伤组出现强荧光点和致密的细胞核,APS处理后凋亡程度减轻。RT-CES显示APS处理可以减少过氧化氢造成的细胞损伤。Caspase-3检测发现过氧化氢造成细胞caspase-3水平升高(P0.05),APS处理后caspase-3水平下降(P0.05)。结论外源性过氧化氢可诱导人视网膜色素上皮ARPE-19氧化应激,造成细胞损伤。APS可降低细胞内氧化应激水平,减少ARPE-19细胞损伤,发挥保护作用。过氧化氢诱导ARPE-19细胞凋亡可能与caspase-3有关,可能是通过降低caspase-3水平来实现。
【关键词】：黄芪多糖 视网膜色素上皮细胞 氧化应激 过氧化氢 凋亡 caspase-3
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 提要3-4
• ABSTRACT4-8
• 引言8-11
• 第一部分 视网膜色素上皮细胞的培养和黄芪多糖安全浓度的测定11-21
• 第一节 视网膜色素上皮细胞的培养11-16
• 材料与方法11-14
• 1 主要材料和试剂11
• 2 主要仪器11-12
• 3 方法12-14
• 结果14
• 讨论14-16
• 第二节 黄芪多糖安全浓度的测定16-21
• 材料与方法16-19
• 1 主要材料和试剂16
• 2 主要仪器16-17
• 3.方法17-19
• 结果19-20
• 讨论20-21
• 第二部分 过氧化氢诱导视网膜色素上皮细胞凋亡21-28
• 材料与方法21-24
• 1 主要材料和试剂21
• 2 主要仪器21-22
• 3 方法22-24
• 结果24
• 讨论24-28
• 第三部分 黄芪多糖对过氧化氢诱导视网膜色素上皮细胞凋亡的抗氧化保护作用28-38
• 材料与方法28-32
• 1 主要材料和试剂28-29
• 2 主要仪器29
• 3.方法29-32
• 结果32-36
• 讨论36-38
• 结论38-39
• 参考文献39-49
• 附录49-50
• 致谢50-51
• 发表论文51-53
• 附件53-60

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本文编号：718237