MicroRNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用研究

发布时间：2017-08-24 11:02

  本文关键词：MicroRNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用研究

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【摘要】：目的:研究micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用。方法:1.建立小鼠穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)模型;2.利用Real-time PCR分析mi R-122、CPEB1的表达;3.过表达agomir/antagomir-122分析CPEB1的表达及细胞凋亡;4.体外培养角膜基质细胞系,利用mi R-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病毒感染角膜基质细胞,后用促炎细胞因子(cytokine,TNFα/IL-1β/TNFγ)刺激并检测角膜基质细胞的凋亡和NO产生。结果:1.穿透性角膜移植术后流式检测:角膜移植术后未排斥组中免疫细胞较对照组的明显增加(P0.05),而排斥组与对照组之间无明显差别(P0.05)。2.Real-time PCR:mi R-122及CPEB1在角膜基质层中的表达最高,与角膜上皮层、内皮层差异有统计学意义(P0.0001);而在免疫细胞(DC、BMM、T cell、B cell)中均未检测到mi R-122的表达,其靶基因CPEB1的表达量也较低。3.基质细胞感染:利用mi R-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病毒感染角膜基质细胞,48hr后感染率均达90%以上;4.过表达agomir/antagomir-122检测:转染agomir-122的基质细胞中,CPEB1的表达低于对照组,角膜基质细胞凋亡降低,差异有统计学意义(P0.05),转染antagomir-122组中CPEB1的表达高于对照组,角膜基质细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P0.05);5.细胞凋亡及NO检测:过表达CPEB1促进角膜基质细胞凋亡和NO产生,差异有统计学意义(P0.05);不论是CPEB1-WT或是CPEB1-Mutated基质细胞,应用细胞因子处理48hr凋亡明显增高,差异有统计学意义(P0.05);细胞因子处理组中,CPEB1-WT组中基质细胞较CPEB1-MT组中凋亡明显下降,差异有统计学意义(P0.05),而未处理组中,CPEB1-WT与CPEB1-MT无明显差异(P0.05);不论有无细胞因子刺激,CPEB1-Mutated基质细胞组中,NO的产生均高于CPEB1-WT组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Micro RNA-122及其靶基因CPEB1在角膜基质细胞高表达,而micro RNA-122在免疫细胞中不表达;当micro RNA-122表达下调时(角膜移植排斥组),CPEB1表达呈上升趋势,导致角膜基质细胞凋亡及NO产生增加,从而促进角膜移植术后免疫排斥反应。
【关键词】：microRNA-122 胞质多聚腺苷酸化结合蛋白1 细胞凋亡 移植免疫排斥 角膜基质细胞
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R779.65
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-4
• 主要缩略词表4-7
• 引言7-10
• 第一章 材料与方法10-26
• 1.1 实验材料10-13
• 1.2 实验方法13-25
• 1.3 统计学分析方法25-26
• 第二章 结果26-28
• 2.1 植片免疫排斥结果26
• 2.2 流式结果26
• 2.3 Real-time PCR结果26
• 2.4 Stromal cell及 293T转染效率结果26
• 2.5 病毒感染结果26
• 2.6 Agomir/antagomir-122功能检测结果26-27
• 2.7 细胞凋亡和NO检测结果27-28
• 第三章 讨论28-31
• 结论31-32
• 参考文献32-35
• 附图35-40
• 综述40-50
• 参考文献46-50
• 攻读学位期间的研究成果50-51
• 致谢51-52

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本文编号：730906