丝胶对2型糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C、血管内皮生长因子表达的影响

发布时间：2017-08-26 06:30

  本文关键词：丝胶对2型糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C、血管内皮生长因子表达的影响

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【摘要】：糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种代谢紊乱性疾病,最终可导致脑、肾、眼及周围神经系统的损害和功能障碍。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病微血管并发症中最严重、最常见的一种,发病率呈逐年上升趋势。DM时持续的高血糖状态可上调体内甘油二酯(diacylglycerol,DAG)水平,激活DAG/蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)通路,引起视网膜血流动力学改变,诱发视网膜微循环障碍。活化的DAG/PKC通路调控其下游信号传导因子-血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,作为诱导视网膜新生血管形成的经典因子,VEGF是参与形成DR病理学改变的重要因素。目前,对DR发病机制的研究已成为治疗DR的关键环节,西医针对DR的治疗方法多种多样,中医药治疗DR的研究也取得了一定进展。丝胶是存在于蚕茧中的高分子水溶性蛋白,约占蚕丝总量的30%。近年来研究发现,丝胶对预防和治疗糖尿病大鼠及其肾脏、睾丸等靶器官损伤有一定保护作用,但具体机制尚未阐明。本研究采用高糖高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)连续腹腔注射诱导2型糖尿病动物模型,探讨丝胶对2型糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用,为进一步研究丝胶治疗DR提供科学依据和理论基础。目的:观察丝胶对2型糖尿病大鼠视网膜PKC、VEGF表达的影响,探讨丝胶对2型糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用。方法:1应用随机数字表将SPF级雄性SD大鼠分为3组:正常对照组(normal control group,NC)、糖尿病模型组(diabetes model group,DM)、丝胶治疗组(sericine treatment group,ST)。正常对照组大鼠给予普通饲料喂养;糖尿病模型组、丝胶治疗组大鼠给予高糖高脂饲料喂养后,采用2%STZ(25mg·kg-1·d-1,3d)连续腹腔注射建立2型糖尿病动物模型,1周后以血糖?16.7mmol·L-1作为成模标准。丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4g·kg-1·d-1)灌胃,连续35d;正常对照组、糖尿病模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,时间同丝胶治疗组。2采用快速血糖仪法监测大鼠血糖,观察大鼠生存状况。3给药结束后腹腔麻醉大鼠,取眼球进行处理。4he染色观察视网膜组织病理学变化。5sp免疫组织化学染色法观察视网膜pkc、vegf蛋白表达。6westernblotting检测视网膜pkc、vegf蛋白及定量分析。7rt-pcr法检测视网膜中pkc、vegfmrna表达及定量分析。结果:各组大鼠生存状态的改变:丝胶治疗组大鼠接受丝胶灌胃治疗前,受声音、震动等影响易暴躁,不喜活动,毛发干枯且有掉毛现象,饮水量及尿量较多,体型削瘦;接受丝胶灌胃治疗后,毛发较之前有光泽,体重增加,饮水量及尿量均较少。糖尿病模型组大鼠易暴躁、毛发质量差、掉毛、体重减轻等现象随着病程的进展而严重,饮水量及尿量较多。整个过程中,正常对照组大鼠各方面无明显变化。血糖监测结果显示:糖尿病模型组大鼠血糖水平明显高于正常对照组(p0.01),丝胶治疗组大鼠血糖水平明显低于糖尿病模型组(p0.01)。he染色观察各组大鼠视网膜形态结构变化:正常组对照大鼠视网膜组织结构完整,视网膜分层清晰且细胞形态完好,内界膜表面光滑,无肿胀、增厚等改变。糖尿病模型组大鼠视网膜内界膜明显肿胀、增厚,视网膜分层欠清晰,部分细胞空泡样变、核固缩,细胞排列紊乱稀疏,且部分内界膜破裂致使内界膜表面粗糙不平,增生的毛细血管内皮细胞突出于内界膜。丝胶治疗组大鼠视网膜分层清晰,内界膜轻度肿胀、增厚,细胞数量减少、排列紊乱等情况较糖尿病模型组少见。免疫组化结合westernblotting及rt-pcr结果发现:与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠视网膜pkc、vegf蛋白及mrna表达显著增加(p0.01);与糖尿病模型组相比,丝胶治疗组大鼠视网膜pkc、vegf蛋白及mrna表达显著减少(p0.01)。结论:糖尿病大鼠视网膜pkc、vegf蛋白及mrna表达明显升高,丝胶通过下调pkc、vegf表达来发挥对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用。
【关键词】：丝胶 糖尿病 视网膜病变 蛋白激酶C 血管内皮生长因子
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R774.1
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 英文缩写11-12
• 前言12
• 材料与方法12-22
• 结果22-24
• 附图24-33
• 附表33-34
• 讨论34-37
• 结论37-38
• 参考文献38-42
• 综述42-54
• 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

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本文编号：740231