职业性噪声聋工人血清miRNAs的表达差异分析

发布时间：2017-09-01 04:28

  本文关键词：职业性噪声聋工人血清miRNAs的表达差异分析

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【摘要】：实验目的:研究职业性噪声聋工人与听力正常工人之间血清中micro RNAs(mi RNAs)的表达差异。通过实验筛选并验证表达差异性mi RNAs,并对其进行靶基因的预测和验证,分析职业性噪声聋致病机理,为后续的研究提供实验数据的支持。实验方法:1.从病人血样标本中分离出300-500μL的血清,并对其进行编号、记录和分装,并在-80℃冰箱进行长期保存。之后建立血液样本信息数据库,并从数据库中筛选后续实验所需的样本。2.对血清样本进行mi RNAs的分离与纯化。将提取出的总mi RNAs用分光光度计进行质量检测,确定浓度和总量是否能够进行mi RNAs的芯片杂交实验。3.进行mi RNAs标记反应体系的准备、10×Blocking Agent的配制、杂交样品的准备、杂交混合液的配制、芯片杂交、芯片洗涤、芯片扫描、芯片数据提取等操作流程,完成mi RNAs芯片实验。并通过图表对mi RNAs杂交实验结果进行评价。最终找出差异性mi RNAs。4.对芯片杂交实验的结果进行荧光定量PCR的验证,分析结果的可信度。再将筛选出的mi RNAs进行靶基因的预测,并验证其对靶基因表达的影响。结果:1.所有血液样本均已提取血清,并进行记录、编号及保存。建立血样数据库,在数据库中筛选出需进行后续实验的血清样本共6个,其中对照组3个,耳聋组3个。2.经过对实验所得mi RNAs进行质量检测,耳聋组(编号1-3)和对照组(编号1-3)样本的mi RNAs浓度及质量达到芯片杂交实验的标准。3.从6个样本的质量检测结果来看样本的完整性和纯度均符合实验要求。通过分析mi RNA芯片杂交实验结果,共筛选出8个差异性mi RNAs,它们是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638和hsa-mi R-4484。4.荧光定量PCR的验证结果表明,在所选耳聋组样本中hsa-mi R-1229-5p和hsa-mi R-483-5p这两条mi RNAs的表达量均高于对照组。对它们的靶基因进行预测,其中hsa-mi R-1229-5p可能的靶基因为ATG101,MAPK1,SLC12A6,SLC25A24,SLC30A8和SLC9C1,hsa-mi R-483-5p可能的靶基因为SRF和MAPK3。经定量PCR结果验证,hsa-mi R-1229-5p的靶基因为MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因为SRF。结论:1.芯片杂交结果表明,从6个样本中共筛选出8个差异性mi RNAs,它们是hsa-mi R-1229-5p,hsa-mi R-3162-5p,hsa-mi R-4459,hsa-mi R-483-5p,hsa-mi R-6087,hsa-mi R-6088,hsa-mi R-638,hsa-mi R-4484。2.经过验证发现职业性噪声聋工人血清中hsa-mi R-1229-5p,和hsa-mi R-483-5p的表达量均高于对照组。靶基因的预测结果及验证表明,hsa-mi R-1229-5p的靶基因为MAPK1,SLC12A6,SLC25A24和SLC30A8,hsa-mi R-483-5p的靶基因为SRF。
【关键词】：microRNA 职业性噪声聋 芯片杂交
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-13
• 第一部分 血液样本的处理与筛选13-17
• 1 实验材料与仪器13
• 2 实验方法与步骤13-14
• 2.1 注意事项13
• 2.2 血液样本离心前的准备13
• 2.3 血液样本的离心13-14
• 2.4 血液样本的保存14
• 3 血液样本的筛选14-15
• 3.1 血液样本数据库的建立14-15
• 3.2 血液样本的筛选15
• 4 结果15
• 5 讨论15-16
• 6 结论16-17
• 第二部分 miRNAs的提取、纯化和质量分析17-22
• 1 实验材料与仪器17
• 2 实验方法与步骤17-20
• 2.1 miRNAs的提取与纯化17-20
• 2.2 miRNAs产量与质量分析20
• 3 结果20
• 4 讨论20-21
• 5 结论21-22
• 第三部分 miRNAs芯片杂交实验22-31
• 1 实验材料与仪器22
• 2 实验方法与步骤22-28
• 2.1 标记反应体系的准备22-24
• 2.2 10×Blocking Agent的准备24
• 2.3 杂交样品的准备24
• 2.4 杂交混合液的准备24-25
• 2.5 芯片洗涤的操作流程25-26
• 2.6 芯片扫描的操作流程26
• 2.7 芯片数据提取的操作流程26-28
• 3 结果28-29
• 4 讨论29
• 5 结论29-31
• 第四部分 miRNAs芯片杂交结果验证与靶基因预测31-47
• 1 实验材料与仪器31
• 1.1 实验试剂及耗材31
• 1.2 实验仪器31
• 2 试验方法与步骤31-44
• 2.1 miRNAs的cDNAs逆转录合成31-32
• 2.2 cDNAs的定量32-33
• 2.3 miRNAs靶基因的预测33
• 2.4 miRNAs靶基因的验证33-44
• 4 讨论44-45
• 5 结论45-46
• 6 小结46-47
• 参考文献47-50
• 文献综述50-59
• 参考文献56-59
• 致谢59-60
• 作者简介60-61
• 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 潘剑英;沈俊;张荣凯;李智富;蔡道章;;基于线粒体PCR基因芯片的骨关节炎发病机制[J];中国组织工程研究;2012年46期

2 丁宛琼;郑邦健;;某电解铝企业综合车间噪声暴露作业人员连续3年听力损伤调查[J];预防医学情报杂志;2009年09期

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本文编号：769896